准备您的订单

确保您的载体满足以下要求：

• 载体体积 ≥ 100 uL（质粒材料不得置于滤纸上提交）
• 载体浓度 ≥ 100 ng/uL
• 载体质量 10 ug
• 必须有细菌复制起点（非低拷贝）
• 必须为克隆群体
• 必须为环形
• 必须有抗生素耐药性标记
• 在插入位点的 40 bp 范围内，不得含有大于 9 bp 的均聚物/重复序列
• 重复：必须包含至少 40 bp 的独特序列，在插入位点的上游和下游无大于 19 bp 的直接或反向重复
• 最终基因产品中不得含有 ccdB
• 在插入位点 50 bp 的范围内，必须能够通过限制酶位点实现线性化
• 必须符合 BSL-1

抗生素耐药性：

质粒必须包含以下大肠杆菌抗生素耐药性标记之一标准浓度如下：

细胞系（大肠杆菌）       

• 生产中可用的细胞系        
• 类似于 DH10Beta 的克隆株   
• 类 Stbl3 菌株（可在 37°C 下生长）        

拷贝编号              

仅允许使用结构复制起点。

生长条件     

• 标准温度：37°C/30°C   
• 标准时间：过夜/24 小时         
• 接种的菌落在 LB-Lennox 上生长 16 小时/24 小时后，必须达到自动化适用大小。

您需要上传 GenBank 格式的完整载体序列以及将送至 Twist 的质粒的完整序列。Twist 将对收到的载体进行测序，以确保序列匹配。若出现任何差异，都会延缓存储过程。

我们不采用基于限制酶的克隆技术。如果预计要在限制性酶切之后进行 DNA 连接，请勿在您的插入片段中加入任何额外的核苷酸。

在您下达克隆基因的订单时，我们会严格按您提供的插入序列进行合成。如果您确实包含了侧翼限制性酶位点，我们也会对其进行合成；不会切除额外的碱基对。一旦收到插入片段序列，就不会以任何方式对其进行处理。

如果您使用 Twist 或定制载体下达克隆基因订单，我们强烈建议您使用设计器中的“下载序列”按钮来仔细检查最终构建体的序列：

请注意，一旦下达了基因订单，我们就不能以任何方式修改序列——如果您发现您的构建体存在错误，请联系 customersupport@twistbioscience.com 寻求帮助。

请提供给我们至少 100 ul 浓度为 100 ng/ul 的 10 ug 载体 DNA。载体 DNA 数量不足将造成存储过程的延迟。

不可以，您必须将载体的完整序列一起发送至 Twist。此信息将用于序列质控和确认克隆策略。我们将对您的载体进行测序，并将其与您发送给我们的序列进行比较。两个序列结果之间的错误或不匹配可能会推迟载体的存储。

确保您的载体满足以下要求：

• 载体体积 ≥ 100 uL（质粒材料不得置于滤纸上提交）
• 载体浓度 ≥ 100 ng/uL
• 载体质量 10 ug
• 必须有细菌复制起点（非低拷贝）
• 必须为克隆群体
• 必须为环形
• 必须有抗生素耐药性标记
• 在插入位点的 40 bp 范围内，不得含有大于 9 bp 的均聚物/重复序列
• 重复：必须包含至少 40 bp 的独特序列，在插入位点的上游和下游无大于 19 bp 的直接或反向重复
• 最终基因产品中不得含有 ccdB
• 在插入位点 50 bp 的范围内，必须能够通过限制酶位点实现线性化
• 必须符合 BSL-1

抗生素耐药性：

质粒必须包含以下大肠杆菌抗生素耐药性标记之一标准浓度如下：

细胞系（大肠杆菌）       

• 生产中可用的细胞系        
• 类似于 DH10Beta 的克隆株   
• 类 Stbl3 菌株（可在 37°C 下生长）        

拷贝编号              

仅允许使用结构复制起点。

生长条件     

• 标准温度：37°C/30°C   
• 标准时间：过夜/24 小时         
• 接种的菌落在 LB-Lennox 上生长 16 小时/24 小时后，必须达到自动化适用大小。

您需要上传 GenBank 格式的完整载体序列以及将送至 Twist 的质粒的完整序列。Twist 将对收到的载体进行测序，以确保序列匹配。若出现任何差异，都会延缓存储过程。

我们不采用基于限制酶的克隆技术。如果预计要在限制性酶切之后进行 DNA 连接，请勿在您的插入片段中加入任何额外的核苷酸。

在您下达克隆基因的订单时，我们会严格按您提供的插入序列进行合成。如果您确实包含了侧翼限制性酶位点，我们也会对其进行合成；不会切除额外的碱基对。一旦收到插入片段序列，就不会以任何方式对其进行处理。

如果您使用 Twist 或定制载体下达克隆基因订单，我们强烈建议您使用设计器中的“下载序列”按钮来仔细检查最终构建体的序列：

请注意，一旦下达了基因订单，我们就不能以任何方式修改序列——如果您发现您的构建体存在错误，请联系 customersupport@twistbioscience.com 寻求帮助。

请提供给我们至少 100 ul 浓度为 100 ng/ul 的 10 ug 载体 DNA。载体 DNA 数量不足将造成存储过程的延迟。

不可以，您必须将载体的完整序列一起发送至 Twist。此信息将用于序列质控和确认克隆策略。我们将对您的载体进行测序，并将其与您发送给我们的序列进行比较。两个序列结果之间的错误或不匹配可能会推迟载体的存储。