设计

我们使用专有的基于同源性的克隆方法来组装我们的克隆基因，因此限制位点对克隆并不重要，您在设计插入片段时也不需要考虑 Twist 的克隆设计。但如果您的插入位点位于两个限制性位点之间，请将这些位点作为载体骨架的一部分，以确保框架具备位点特性。

有两种使用限制性内切酶克隆的选择。

选择 1 - 在插入片段上加入限制性位点

包括插入序列两端的整个限制性内切酶位点。限制性内切酶位点将是计算机中插入片段的一部分。

当订购基因时，您必须在插入片段上加入限制性内切酶位点。在定制载体存储方案中，如果您在订单中排除了基因上的限制性内切酶位点，那么您的最终产品中将完全没有限制性内切酶位点。

选择 2 - 在载体上加入限制性位点

请勿在插入序列中包含限制性内切酶位点。在定制载体存储表的“载体 + 插入”框中加入每个完整的限制性内切酶位点。限制性内切酶位点将是计算机中载体的一部分。

当订购基因时，请勿在插入片段上加入限制性内切酶位点。在定制载体存储方案中，如果您在订单中添加了基因上的限制性内切酶位点，那么您的最终产品中将重复出现限制性内切酶位点。

将您的插入片段输入设计器并选择定制载体，然后从 Twist 网站下载最终的构建序列。

详情如下：

下订单时：

点击草稿页面的“下载序列”按钮，您将获得整个订单的插入片段、载体和最终构建序列的详细信息。

点击基因编辑器页面上的“下载构建体 (GenBank)”按钮，您将获得带有最终构建序列的 GenBank 注释文件。

下订单后：

从主页进入“订单和草稿”界面，然后单击“打开订单”。找到目标订单后，将显示订单信息。您可以点击“原始提交序列”按钮，下载包含最终序列的文件。

在应用程序上设计插入位点后，单击数字框旁边的“预览并添加”链接，以定位或序列的形式查看插入位点。查看插入位点并确定插入位点配置正确后，选择“同意插入位点”。插入位点的详细信息将在界面左侧的“插入位点”下显示为一行，您可以使用新的插入位点继续编辑草稿。然而，请注意，虽然每个定制载体可添加多个插入位点。但一次只能将一个插入片段克隆到载体中。

注：如果您希望在已录入我司系统的载体上新增一个插入位点，无需重新寄送载体材料，但需要联系客户支持部 customersupport@twistbioscience.com，因为此项变更需通过特殊申请表单完成系统重录。

带有一个插入位点的载体被视为一次存储事件。多个插入位点将产生多个存储事件。

第一个插入位点一次性交纳 500 美元的安装费用，后续同一个定制载体内每插入一个额外的位点，将交纳 250 美元的安装费用。