常规问题

对于基因片段（无论是否有接头），您可以选择在每个片段的末端添加您自己的限制性位点，以便轻松地将片段克隆到您所选的载体中。

对于克隆基因，只需提交您希望我们克隆到载体骨架上的独有插入序列即可。我们使用专有的、基于同源性的克隆方法来组装我们的克隆基因，并为您设计和添加同源的突出位点序列，您在设计插入片段时无需受限于我们的克隆策略。

请注意，我们的克隆载体没有直接位于插入片段两侧的限制性位点。这使得设计具有充分的灵活性，因此您可以将所需的限制性位点附加到插入片段的两侧，以便在下游工作流程中使用。

我们的表达载体插入点由两个限制性位点表示——它们将完整地保留在您最终构建体插入序列的侧翼。我们建议客户通过单击设计器中的“下载序列”按钮来查看最终的构建体序列。制造订单一旦提交，就不能再以任何方式更改。

Twist Bioscience 保证公司遵守美国科技政策办公室 (OSTP) 核酸合成筛选框架的所有要求。点击此处下载证明

基因产品通常以干燥产品的形式交付（除非另有规定）。

克隆基因需被克隆到 Twist 的目录载体或者客户的定制载体中，然后才能交付。基因片段以线性双链序列的形式交付（无论有或没有侧翼接头）。

我们通过 96/384 孔板来交付基因序列。对于小批量订单（少于 10 个），基因可通过试管来交付，无需支付额外费用。对于 10 个及以上基因的订单，根据试管订购要求，每个订单需额外支付 50 美元。

登录账户后，您可以下载任何订单的孔板排列信息。

在主页中，点击“订单和草稿”，然后点击“过往订单”，将显示您所有的 Twist 订单。点击目标订单，在“已交付”选项卡上将显示可以下载孔板排列信息的链接。

我们所有的克隆基因合成产品均经过 NGS 测序验证。

基因片段未经 NGS 验证。由于基因合成错误率较低，因此我们估计要获得置信度为 99% 的序列完美克隆，600、1200 或 1800 bp 的基因片段分别需要测序大约 3、4 或 6 个克隆。

基因生产不存在差异，在质量方面也没有优缺点，仅仅只是偏好而已。一些客户优选试管而非孔板，因为试管可以满足他们的储存需求。而其他一些客户则优选孔板，因为孔板适用于高通量工作流程。对于 10 个或以上基因的订单，如果需要试管，将额外收取 50 美元的固定费用。

对于基因片段，我们保证每个片段收率为 100-1000 ng。

对于克隆基因，有各种收率选项可选：

• 微量制备：每个克隆 1 µg - 4 µg
• 小量制备：每个克隆 4 µg - 10 µg
• 中量制备：每个克隆 10 µg - 100 µg
• 大量制备：每个克隆 100 µg - 1 mg

收率因您的序列（以及克隆基因的载体）而异，可能会更低。如果收率低于正常值，可能会因收率过低而导致基因合成失败。请注意，由于收率过低而合成失败的序列仍会交付，但不会收取您的费用。此外，还提供用于小规模制备的定制目标收率。

Twist 的 DNA 产品经干燥后，装入 96/384 孔板或 2 mL 微量离心管中。尽管双链 DNA 在大多数标准存储条件下都呈稳定状态，但我们建议您采用以下方法来保持 DNA 的高品质：

• 收到产品后，将试管或孔板短暂进行离心，并将 DNA 在 pH 8.0 的无核酸酶 Tris-EDTA (TE) 缓冲液或 pH 8.0 的 10 mM Tris-HCl 中重悬至所需浓度。
• 我们不建议在水中重悬。
• 建议储备溶液的浓度至少为 10 ng/uL，但最佳浓度需要根据您所需的应用来确定。
• 制备原液和工作溶液并将两者分装，以防止发生污染并减少冻融的次数。
• 若要长期储存，将 DNA 置于 -20°C 温度下冰冻长达一年，或在 -80°C 温度下冰冻更长时间。

请点击此处查看重悬指南。

克隆基因最低保证收率为 50 ng。在少数情况下，序列经过 NGS 确认后，我们可能仍然无法满足最低收率，但我们仍然会发运我们能够回收的所有物料。

对于这些构建体，其收率将显示为“NA”。您可以尝试通过转化为细菌来挽救该构建体（要获得更多信息，请联系客户支持部）。对于不符合最低收率的构建体，将不会收取您的费用。

为了确保生产过程不受牛传染性疾病的影响，Twist 在整个克隆、转化、扩增和纯化过程中提供使用非动物源性材料生产的纯化 DNA 构建体。

基因片段组装后通过片段分析检查其大小和纯度，但未经过序列验证。因此，基因片段为非克隆片段（即为完美和非完美材料的混合）。如果您计划克隆片段，则必须筛选多个克隆。片段的大小可能从长度 300 至 5,000 bp 不等。

相反，克隆基因先被组装，然后克隆到定制载体或 Twist 的目录载体之一。然后对克隆进行 NGS 序列验证，以确认发运和交付的仅为所需的序列。克隆基因的大小可能从长度 300 至 5,000 bp 不等。

目前，基因片段（线性双链 DNA）最大为 5 kb。克隆基因（克隆到载体中的基因）的最大长度为 5 kb。

目前，我们基因合成产品（基因片段或克隆基因）最小长度为 300 bp。

Twist Bioscience 合成的 DNA 产品会经干燥处理，或重悬在 2 mL 微量离心管、96 孔板或 384 孔板中后运输。干燥的 DNA 在室温下运输，而重悬的 DNA 则在冷冻状态下运输。

双链 DNA 和单链寡核苷酸在大多数标准实验室存储条件下呈稳定状态。但是，为了保持 Twist Bioscience 合成 DNA 的高品质，遵循以下最佳实践十分重要。

• Twist 建议根据存储条件，遵循以下干燥的 DNA存储期限。
  • 室温时，可储存 3 个月。
  • 4°C 时，可存储 12 个月。
  • -20°C 时，可储存 24 个月。
  • -80°C 时，可长期储存。
• 重悬指南
  • 重悬时，在打开试管或孔板之前进行短暂离心，并在 pH 8.0 的无核酸酶 Tris-EDTA (TE) 缓冲液或 pH 8.0 的 10 mM Tris-HCl 中重悬至所需浓度。
  • 建议使用浓度至少为 10 ng/μL 原液稀释液，但最佳浓度需要根据您所需的应用来确定。
  • 制备分装的原液稀释液以及工作溶液，以降低污染的发生几率并减少冻融的次数。制备完成后应尽快使用工作溶液，并尽量减少高温暴露。
• 重悬的 DNA
  • 重悬适用于某些产品。您的 DNA 产品在运输时可能会采用下列缓冲液之一。我们建议在打开之前，对试管或孔板进行简单的离心。
    • 洗脱缓冲液（2 mM Tris-Cl，pH 8.5）
    • TE 缓冲液（10 mM Tris-Cl pH 8.0，1 mM EDTA）
    • TE 缓冲液低 EDTA（10 mM Tris-Cl pH 8.0，0.1 mM EDTA）
    • 水       
      • 我们不建议在水中长期储存。
  • 根据储存条件的不同，Twist 建议重悬后 DNA 的储存期限如下。
    • 室温时，可储存 3 个月。
    • 4°C 时，可存储 12 个月。
    • -20°C 时，可储存 24 个月。
    • -80°C 时，可长期储存。

在订购克隆基因时，用户可在结账时选择整数质量的 DNA 作为其质粒制备的一部分进行交付。质量会自动测量并确保用户获得准确质量。如果我们在一次制备中没有达到所需的质量，我们会进行额外的制备，直到达到所需的质量。

带接头的基因片段的交付时间为 2-4 个工作日，不带接头的基因片段为 4-8 个工作日。

快速克隆基因的周转时间最快 4-7 个工作日，标准克隆基因的最快 10 个工作日。

克隆基因的时间线基于成功完成合成和克隆所需的时间。如果基因合成在任何一步失败，都会进入我们的重获流程，可能会延迟交付。可选服务（如要求更高产量）可能会延长交付时间。

我们的网页上仅提供了 NGS 产品的 SDS 文件；如需获得我们合成生物学产品的 SDS 文件，请发送电子邮件至 customersupport@twistbioscience.com。