克隆后,我应该选择多少个菌落来增加找到具有正确序列的克隆的机会?

对于标准复杂度序列,并且考虑到我们的错误率为 1/7500,如图所示,选择推荐的菌落数量时找到具有正确序列的菌落的成功率为 95%。

请注意,该建议只是一个起点。各种因素(如载体类型、序列复杂性和序列内容)都会影响菌落生长。在某些情况下,可能需要选择 2 到 3 倍的推荐菌落数量。

 

菌落选择


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是否将接头序列附加在我的序列两端?

对于接头打开的基因片段,会将通用接头合成至每个片段的两端。接头长度为 21-22 个核苷酸。具有这些接头的片段与多种组装方法兼容,即限制性酶切/连接、通路、Golden Gate 和 TOPO 克隆。

通过在接头内部添加限制性位点可移除接头。TOPO 克隆将发挥作用,但接头会保持打开状态。

 

接头序列

  • 2021 年 8 月 9 日之前收到的订单,接头序列如下:
    • 5' 接头:GAAGTGCCATTCCGCCTGACCT
    • 3' 接头:AGGCTAGGTGGAGGCTCAGTG
    • 5’ – GAAGTGCCATTCCGCCTGACCT – insert – AGGCTAGGTGGAGGCTCAGTG – 3'

 

  • 2021 年 8 月 9 日至2021 年 11 月 1 日收到的订单,接头序列如下:
    • 5' 接头:CCCCGTCACCTTTGGCTTATCAGT
    • 3' 接头:AGTGACATCTGGACGCTAAGACCG
    • 5' – CCCCGTCACCTTTGGCTTATCAGT – 插入片段 – AGTGACATCTGGACGCTAAGACCG – 3'

 

  • 2021 年 11 月 2 日及之后收到的订单,接头序列如下:
    • 5' 接头:CAATCCGCCCTCACTACAACCG
    • 3' 接头:CTACTCTGGCGTCGATGAGGGA
    • 5’ - CAATCCGCCCTCACTACAACCG – 插入片段 – CTACTCTGGCGTCGATGAGGGA - 3’

 

*接头是添加到插入片段两端的短序列,该添加步骤是我们合成过程的一部分。在检验过程中也可获得不含这些接头的基因片段。

如果您对您的订单有任何问题,请联系我们:customersupport@twistbioscience.com 

 


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基因片段是否纯化?

是,基因片段经过磁珠清洁;然而,可能残留少量的短片段。


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接头打开的基因片段上使用的接头序列是什么?

  • 2021 年 8 月 9 日之前收到的订单,接头序列如下:
    • 5' 接头:GAAGTGCCATTCCGCCTGACCT
    • 3' 接头:AGGCTAGGTGGAGGCTCAGTG
    • 5’ – GAAGTGCCATTCCGCCTGACCT – insert – AGGCTAGGTGGAGGCTCAGTG – 3'

 

  • 2021 年 8 月 9 日至2021 年 11 月 1 日收到的订单,接头序列如下:
    • 5' 接头:CCCCGTCACCTTTGGCTTATCAGT
    • 3' 接头:AGTGACATCTGGACGCTAAGACCG
    • 5' – CCCCGTCACCTTTGGCTTATCAGT – 插入片段 – AGTGACATCTGGACGCTAAGACCG – 3'

 

  • 2021 年 11 月 2 日及之后收到的订单,接头序列如下:
    • 5' 接头:CAATCCGCCCTCACTACAACCG
    • 3' 接头:CTACTCTGGCGTCGATGAGGGA
    • 5’ - CAATCCGCCCTCACTACAACCG – 插入片段 – CTACTCTGGCGTCGATGAGGGA - 3’

 

*接头是添加到插入片段两端的短序列,该添加步骤是我们合成过程的一部分。在检验过程中也可获得不含这些接头的基因片段。

如果您对订单有任何问题,请联系我们:{{[email protected]}}customersupport@twistbioscience.com


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合成基因片段的价格是多少?

您可以单击此处,在您的账户中找到基因片段产品的定价表。

如果您需要联系客户经理了解定价事宜,可以在电子商务中的“账户”下找到其联系信息。


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可以使用哪些方法来克隆接头打开的基因片段?

您可以借助以下方法,使用接头克隆基因片段:

酶切/连接——将限制性位点置于 Twist 接头内,以便克隆

IIS 型或 Golden Gate——将限制性位点置于 Twist 接头内部,以便于进行 TOPO 克隆(平端),接头序列也将被克隆进去

Gateway 克隆——在您的序列两端增加 attB 位点

了解更多信息,请点击此处


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在哪里可以找到基因片段的分析证书(COA)?

我们可为已完成的订单提供分析证书(COA)。您可以单击此处,在您的账户中找到基因片段产品的分析证书。


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