为更卓越而生:覆盖均一性更佳、文库产出更高、变异鉴定更可靠

Twist TrueAmp 文库制备方案为 NGS 靶向富集流程提供稳定、高质量的文库,尤其擅长应对具有挑战性的低起始量样本。该流程采用 Twist TrueAmp 聚合酶驱动,并针对酶切片段化进行优化,可实现高转化效率、低 GC 偏倚及均衡的覆盖度,从而支持在复杂基因组区域实现精准的变异鉴定。

产品数据

在最具挑战的样本中实现高产量和覆盖率

TrueAmp 文库制备方案能在低起始量、降解的 FFPE DNA 样本中,提供更高的捕获前产出、更稳定的文库片段大小和更强的平均靶标覆盖度,有效保持文库复杂性,并通过具有挑战性的样品增加可靠的测序结果。

覆盖更均一,漏检靶标更少

Twist TrueAmp 文库制备方案实现了更优的覆盖均一性,并减少了零覆盖区域。更低的靶标脱落率,确保关键区域能被稳定测序,提升结果可信度。

在 GC 含量极端区域实现更佳覆盖

Twist TrueAmp 聚合酶预混液可在高 GC 和低 GC 区域提供更均一的覆盖,即使在增加 PCR 循环数时也能保持稳定性能。

为不同起始量和工作流程的一致性而构建

Twist TrueAmp 文库制备试剂盒可在广泛的样本起始量范围内,产生稳定的 DNA 文库片段大小,支持混合起始量工作流程,同时确保大规模应用下覆盖均一、结果可重复。

可控插入片段,实现可调性能

Twist TrueAmp 文库制备试剂盒可在广泛的样本起始量范围内,产生稳定、重复性高的 DNA 文库片段大小,确保测序结果与下游分析的可信度。

图 1. 通过对低起始量、已降解 FFPE 样本(DIN 值<2.2)的富集文库进行性能比较,TrueAmp 文库制备试剂盒相较于竞品 K 试剂盒,在挑战性样本应用中展现出卓越表现。(A) Twist TrueAmp 文库制备试剂盒可产生卓越的捕获前文库产量,体现了优异的文库构建与扩增效率。(B) The Twist TrueAmp Library Preparation Kit shows higher library complexity when compared with the competitor's kits. 这意味着文库中具有更多可供测序的独特 DNA 分子,从而有效降低测序成本。(C) 实现更高的覆盖率。

图 2. 通过对低起始量、已降解 FFPE 样本(DIN 值<2.2)的富集文库进行性能比较,TrueAmp 文库制备试剂盒相较于竞品 K 试剂盒,在挑战性样本应用中展现出卓越表现。(A) 提供出色的覆盖均一性,通过较低的基于第 80 百分位数的碱基罚分来衡量。(B) 无覆盖的区域减少,以零覆盖目标区域百分比衡量。

图 3. 归一化 GC 偏差曲线显示 Twist TrueAmp 聚合酶的覆盖范围提升。使用 Twist TrueAmp 文库制备试剂盒制备文库,并采用不同聚合酶及循环数进行扩增。

上检测组合图: 比较不同聚合酶在 3 个 PCR 循环下,针对 GC 窗口的归一化覆盖度。
下检测组合图: 比较不同聚合酶在 16 个 PCR 循环下,针对 GC 窗口的归一化覆盖度。

图 4. Twist TrueAmp 文库制备试剂盒在不同超低起始量下仍保持稳定的文库片段大小。

将 500 ng、100 ng、50 ng、10 ng 及 1 ng (gDNA) 样本于 32℃ 分别进行片段化处理,并分别采用 3、5、6、8、10 和 14 个 PCR 循环进行扩增。所有样本均设置双重复实验。

A:Twist TrueAmp 文库制备试剂盒生成的 NGS 文库电泳图。

B:不同起始量的 DNA 扩增后的文库浓度。

Figure 5. Twist TrueAmp 文库制备试剂盒的可调性。

A: 使用不同片段化时间生成的五个 NGS 文库电泳图。50 ng 高质量 gDNA 在 32℃ 下进行不同时长的片段化,并使用 6 个 PCR 循环进行扩增。
B: 插入片段中位大小与时间关系。在 32℃ 下将 50 ng 高质量 gDNA 进行不同时长的片段化。使用 6 个 PCR 循环进行扩增。使用 Twist 外显子组 2.0 检测组合捕获样本。

视频缩略图

活动内容

1

酶切片段化

提取的样品 DNA 被精确片段化,产生稳定的、可调的插入片段大小。

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2

接头连接

优化的 Twist 连接酶可最大限度地提高转化效率,并最大限度地减少连接偏倚。

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3

通过 TrueAmp 聚合酶扩增

高保真扩增支持挑战性区域的高产量,并提高变异检测能力。

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