You can find the pricing table for Gene Fragment products in your account by clicking here.

If you need to contact your Account Manager regarding pricing, their contact information is available in eCommerce under Account.

您可以借助以下方法，使用接头克隆基因片段：

Restriction digestion/Ligation - place restriction sites inside of the Twist adapters for easy cloning

Type IIS or Golden Gate - place restriction sites inside of the Twist adapters for easy cloning TOPO cloning (blunt-end) - the adapter sequences will be cloned in as well

Gateway cloning - add attB sites to the ends of your sequence

For more information, click here.  

对于接头打开的基因片段，会将通用接头合成至每个片段的两端。接头长度为 21-22 个核苷酸。具有这些接头的片段与多种组装方法兼容，即限制性酶切/连接、通路、Golden Gate 和 TOPO 克隆。

通过在接头内部添加限制性位点可移除接头。TOPO 克隆将发挥作用，但接头会保持打开状态。
接头序列

• 2021 年 8 月 9 日之前收到的订单，接头序列如下：
  • 5' 接头：GAAGTGCCATTCCGCCTGACCT
  • 3' 接头：AGGCTAGGTGGAGGCTCAGTG
  • 5’ – GAAGTGCCATTCCGCCTGACCT – insert – AGGCTAGGTGGAGGCTCAGTG – 3'

• 2021 年 8 月 9 日至2021 年 11 月 1 日收到的订单，接头序列如下：
  • 5' 接头：CCCCGTCACCTTTGGCTTATCAGT
  • 3' 接头：AGTGACATCTGGACGCTAAGACCG
  • 5' – CCCCGTCACCTTTGGCTTATCAGT – 插入片段 – AGTGACATCTGGACGCTAAGACCG – 3'

• 2021 年 11 月 2 日及之后收到的订单，接头序列如下：
  • 5' 接头：CAATCCGCCCTCACTACAACCG
  • 3' 接头：CTACTCTGGCGTCGATGAGGGA
  • 5’ - CAATCCGCCCTCACTACAACCG – 插入片段 – CTACTCTGGCGTCGATGAGGGA - 3’

*接头是添加到插入片段两端的短序列，该添加步骤是我们合成过程的一部分。在检验过程中也可获得不含这些接头的基因片段。

如果您对您的订单有任何问题，请联系我们：customersupport@twistbioscience.com

是，基因片段经过磁珠清洁；然而，可能残留少量的短片段。

• 2021 年 8 月 9 日之前收到的订单，接头序列如下：
  • 5' 接头：GAAGTGCCATTCCGCCTGACCT
  • 3' 接头：AGGCTAGGTGGAGGCTCAGTG
  • 5’ – GAAGTGCCATTCCGCCTGACCT – insert – AGGCTAGGTGGAGGCTCAGTG – 3'

• 2021 年 8 月 9 日至2021 年 11 月 1 日收到的订单，接头序列如下：
  • 5' 接头：CCCCGTCACCTTTGGCTTATCAGT
  • 3' 接头：AGTGACATCTGGACGCTAAGACCG
  • 5' – CCCCGTCACCTTTGGCTTATCAGT – 插入片段 – AGTGACATCTGGACGCTAAGACCG – 3'

• 2021 年 11 月 2 日及之后收到的订单，接头序列如下：
  • 5' 接头：CAATCCGCCCTCACTACAACCG
  • 3' 接头：CTACTCTGGCGTCGATGAGGGA
  • 5’ - CAATCCGCCCTCACTACAACCG – 插入片段 – CTACTCTGGCGTCGATGAGGGA - 3’

*接头是添加到插入片段两端的短序列，该添加步骤是我们合成过程的一部分。在检验过程中也可获得不含这些接头的基因片段。

If you have any questions about your order, please contact us at customersupport@twistbioscience.com

以下是我们网站上支持密码子优化的生物体列表：

• 拟南芥
• 黑曲霉
• 米曲霉
• 枯草杆菌
• 欧洲油菜
• 秀丽隐杆线虫
• 灰仓鼠 (CHO)
• 黑腹果蝇
• 大肠杆菌
• 橹豆
• 智人
• 红褐肉座菌
• 苜蓿
• 小家鼠
• 烟草
• 矮牵牛
• 毕赤酵母
• 豌豆
• 褐家鼠
• 酿酒酵母
• 马铃薯
• 草地贪夜蛾
• 天蓝色链霉菌 A3(2)
• 野猪
• 刚地弓形虫
• 爪蟾
• 解脂耶氏酵母
• 玉米

If you do not see your specific organism, contact customersupport@twistbioscience.com

目前，我们无法合成评级为“不可能”的基因。导致我们的算法将基因评级为“不可能”的因素有多种，而每个基因序列的具体参数是唯一的。我们的算法为专有算法，是利用机器学习开发的。除机器学习外，我们的算法还考虑了以下因素：

• GC 百分比在 25%-65% 之间
• 最大均聚物长度 <10
• 低同源性

以上因素的任意独特组合会导致特定基因序列被评为“不可能”。

为了保持野生型蛋白质表达：

• 我们会避免使用稀有密码子（密码子频率低于 8%）。
• 我们会确保所得序列的前 48 个碱基对中的序列没有牢固的发夹结构 (ΔG < -8)。
• 我们会对两条链都进行检查，确保它们没有包含您要求避免的酶切位点。
• 我们会通过避免产生 sigma70 强结合位点来防止将启动子序列引入表达序列的内部。
• 我们会避免那些产生核糖体强结合位点的序列（GGAGG 和 TAAGGAG）。
• 我们会避免那些产生终止子序列的序列（TTTTT 或 AAAAA）。

为了提高合成的成功率：

• 我们不会引入任何超过 20 bp 的重复序列。
• 我们避免存在 10 个或更多碱基的均聚物。
• 我们避免那些产生小于 25％ 或大于 65％ 的整体 GC％ 和小于 35％ 或大于 65％ 的局部 GC 窗口 (50 bp) 的拟合序列。

请注意，密码子优化有助于提高成功合成的概率，而非蛋白质表达。

重复结构、极端 GC 含量和均聚物是合成问题的主要影响因素。我们使用机器学习方法来确定成功概率。因此，在大多数情况下，序列排斥的原因并非单一。相反，复杂性或排斥源于多种特征的结合，这些特征共同导致了序列的复杂性。唯一的硬性规定如下：

• 避免均聚物 >= 14 bp

• 请勿包括 CcdB（II 型毒素-抗毒素系统）

如果遇到问题，我们建议删除或减少重复、极端 GC 含量的区域和均聚物。如果您的序列复杂、无法构建或包含与我们的内部流程相冲突的序列，我们将强调需要关注的区域。

在我们的网站上提交您的基因序列后，将自动对基因序列进行组装可行性评分：

Standard: No errors have been found. 基因序列的总体复杂程度（如长度、GC 含量、同源性等）为“标准”。

Complex: No errors have been found. 存在一些序列复杂性（如长度、GC 含量、同源性等），但我们预计在合成您的基因时不会出现任何问题。在极少数情况下，序列可能会有周转时间增加或制造失败的风险。

Error: Gene sequence contains errors. 请单击序列，详细了解如何解决存在的错误。

Not Accepted: The sequence contains elements that make it impossible for us to synthesize. 请参阅错误信息提供的详细说明，或参考设计指南。

关于评分系统

我们的评分系统利用机器学习模型分析并结合多个序列参数（即总 GC 百分比、最大均聚物长度、最大重复长度、序列长度、重复密度等）。该模型使用我们的历史制造数据进行打磨，它可以更精确地估计基因和抗体产品的生产成功率

关于 ISSUE 信息

Warnings: Are associated with the risk of failure, predicted by the machine learning model. 警告次数越多，越有可能导致“不可接受”得分。

Errors: Are not associated with gene complexity, and they can be fixed by correcting the gene design

我们的网站将接受氨基酸序列，并将其转化为 DNA 序列之后进行合成。请在“上传序列”页面中选择“氨基酸序列”选项。


 请确保您输入的仅包含氨基酸单字母字符。我们仅支持标准的 20 个单字母代码字符。

氨基酸序列末尾的“*”表示终止密码子（我们不会自动添加终止密码子）

将根据您选择的密码子使用频率表，选择最常用的密码子。

如果您未找到所需的特定生物体，请联系 customersupport@twistbioscience.com 获得帮助。

克隆基因注意事项：并非所有的 Twist 表达载体在插入点上游都含有标准表达机制。We recommend double-checking the sequence of your final plasmid construct by clicking "Download Sequences"after selecting your desired vector. 

客户可以选择订购寡核苷酸池、基因片段和克隆基因。

寡核苷酸池中的寡核苷酸（线性单链 DNA）大小范围为 20 - 300 bp。

基因片段为线性双链 DNA，其大小范围为 300 - 5,000 bp。

克隆基因为双链 DNA，已经被克隆到 Twist 的载体或客户提供的定制载体中。克隆基因大小范围为 300 - 5,000 bp。