Optimizing the efficiency of next generation sequencing (NGS) often involves targeted enrichment of genomic regions of interest prior to sequencing. 在 Twist Bioscience 靶向富集工作流程中，设计了生物素化合成 DNA 探针与外显子或其他定制基因组区域杂交。与基因组 DNA 样本杂交后，对探针进行纯化，以产生针对靶向区域富集的样本。
Twist 通用封闭剂通过阻断接头序列之间的非特异性杂交，增强靶捕获的特异性。在杂交过程中阻断非特异性相互作用简化了实验设计和实施，降低了测序成本，并优化了靶向测序工作的结果。
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Twist 通用封闭剂含有通用接头序列的专有混合物 1。这些序列结合基因组文库片段，阻断 TruSeq 兼容接头之间的交叉杂交，并提高靶向捕获率。Twist 通用封闭剂可以提高任何使用与 TruSeq 兼容接头的靶向富集工作流程的性能。
TruSeq 接头标签设计中 Twist 通用封闭剂的性能
性能不受标签设计的影响。Twist 通用封闭剂在各种单端标签和双端标签 TruSeq 兼容接头上的靶向性能。从单个基因组来源产生单个文库（NA12878；Coriell）和 TruSeq 兼容的接头，其标签长度范围为 6 至 14 bp（不包括唯一分子标识符 [UMI] 长度）。在不存在或存在 Twist 通用封闭剂的情况下，按照生产商关于 16 小时杂交反应的建议，使用外显子组靶向富集组合 (33.1 Mb; Twist Bioscience) 进行杂交捕获，每个文库使用 500 ng gDNA。所有样本中均存在 Cot DNA。使用 NextSeq 500/550 High Output v2 试剂盒进行测序，生成 2x76 双端读长。将数据下采样至靶标大小的 150 倍，并使用 Picard Metrics 进行分析，映射质量为 20。中靶碱基百分比包括中靶和靶点附近的碱基，由公式 1 - PCT_OFF_BAIT 定义。误差线表示一个标准偏差或观测值范围；N ≥ 2。
稳定的封闭剂设计可最大程度提高组合设计的灵活性
性能不受组合大小的影响。Twist 通用封闭剂在各种组合大小中的靶向性能。单个文库由单个基因组来源 (NA12878; Coriell) 和 8 bp 双端标签 TruSeq 兼容接头生成。根据生产商的 16 小时杂交反应建议，在存在或不存在 Twist 通用封闭剂的情况下，使用各种大小的靶向富集组合（0.04 Mb 至 33.1 Mb；Twist Bioscience）和每个文库 500 ng 的 gDNA 进行杂交捕获。所有样本中均存在 Cot DNA。使用 NextSeq 500/550 High Output v2 试剂盒进行测序，生成 2x76 双端读长。将数据下采样至靶标大小的 150 倍，并使用 Picard Metrics 进行分析，映射质量为 20。中靶碱基百分比包括中靶和靶点附近的碱基，由公式 1 - PCT_OFF_BAIT 定义。误差线表示观测值范围；N=2。
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