Dickkopf-1 (DKK1) 是一种已知在肿瘤微环境中过度表达的内源性蛋白质。既往研究表明，抗 DKK1 抗体在多种不同癌症中具有抗肿瘤作用。Twist Biopharma Solutions 的多学科黄金标准平台整合了抗体发现的体外、体内和生物信息学方法。在这项研究中，我们利用 Twist 的体外和生物信息学方法，利用 Twist 的高多样性合成噬菌体库以及机器学习策略，发现了有效的抗 DKK1 抗体。使用噬菌体展示法选出两个合成的人源化 VHH 文库，并通过酶联免疫吸附试验 (ELISA) 筛选噬菌体淘选结果，以确定潜在的候选者。还通过下一代测序 (NGS) 对淘选结果进行了测序 - NGS 结果被用于各种机器学习模型，以预测更多潜在候选者。Sequences were reformatted into VHH-Fc, and synthesized and produced with Twist’s high throughput synthesis and production platform.  Resulting antibodies were evaluated for binding on SPR, as well as further downstream characterization and in vivo studies. 此外，我们的模块化 VHH 平台使我们能够将有前景的 mAbs 快速转化为双特异性抗体 (bsAb)。

Twist Biopharma Solutions 致力于与我们的合作伙伴携手开发有效的抗体疗法，利用我们集成的体外和体内抗体发现平台。在本演示文稿中，我们将展示利用我们的“文库中的文库”发现抗 4-1BB-Nectin-4 双特异性抗体 (bsAb)，然后进行高通量抗体生产 (HTIgG)、表面等离子体共振 (SPR) 表征和基于细胞的检测。由于 4-1BB 的广泛表达和激活对强大免疫反应至关重要的多种信号通路的能力，4-1BB 已作为一种多功能免疫治疗靶点而备受关注。与此同时，Nectin-4 在乳腺癌、肺癌和卵巢癌等多种实体瘤中明显过表达，已成为一个极具吸引力的精准医疗靶点。我们的顶级候选药物在信号传导试验和免疫细胞活化试验中表现出强大的功效。这些令人鼓舞的结果表明，这些候选药物值得在临床前研究中进一步探索，并有可能开发成治疗性抗体。

利用 Twist 的精确 DNA 合成技术生成了多种高度多样化的合成抗体库，为抗体发现过程提供了有力支持。这些“文库中的文库”包括结构 scFv 库、AI 高突变 scFv 库和 hCamel Zero VHH 库。By leveraging these synthetic libraries, a wide range of high-affinity antibody candidates have been identified across multiple protein targets.  In this project, we demonstrate the validation process of constructed synthetic antibody libraries. 使用噬菌体展示法针对生物素化蛋白质靶标选出文库，并进行酶联免疫吸附试验 ELISA 来筛选独特的候选者。通过高通量蛋白质纯化流程，候选蛋白可被重新格式化为 VHH-Fc 或 IgG，然后通过 SPR 对其进行表征。