Allgemeines

Sie können zur Aufreinigung eine Protein-A- oder -G-Festphase verwenden, die je nach Spezies und Isotyp des IgG an die FC-Region der Antikörper bindet. Alternativ können Sie immobilisiertes Antigen (Volllängen- oder kurzes Peptidantigen) verwenden, um die Antikörper zu reinigen. Das Verfahren hängt von der nachgelagerten Anwendung und der Spezifität des Antikörpers ab.

Kunden können den Expressionsvektor pTwist CMV BG WPRE Neo auswählen, wenn sie ihre eigene Fc-Region-Sequenz (IgG3, Maus-IgG oder modifiziertes Fc) verwenden oder eine andere Art von Fc-Fusions-Antikörpern exprimieren möchten.

Bitte denken Sie daran, am Ende Ihrer Codierungssequenz ein Stoppcodon einzufügen. Wenn Sie Fragen zum Design haben, senden Sie bitte eine E-Mail an [email protected], um Hilfe bei Ihrer individuellen Anfrage zu erhalten.

Twist liefert klonale Gen-Glycerinvorräte aus den klonalen Genen, die für die Antikörperproduktion synthetisiert wurden. Während der Antikörperproduktion wird die DNA für die Transfektion konsumiert; Glycerinvorräte werden jedoch reserviert und zusammen mit den Antikörpern nach der Produktion geliefert. Bitte beachten Sie unser Protokoll zur Vorbereitung frischer DNA aus Glycerinvorräten. 

Die Preistabelle für Antikörperspezialprodukte finden Sie in Ihrem Konto, indem Sie hier klicken.

Wenn Sie sich bezüglich der Preise an Ihren Kundenbetreuer wenden müssen, finden Sie die entsprechenden Kontaktinformationen in E-Commerce unter Konto.

Twist verwendet die Industriestandard-Zelllinien Thermo Fisher Scientific Expi293™ und Thermo Fisher Scientific ExpiCHO™.

Eine Leader- oder sekretorische Signalsequenz fungiert als Peptidsignal, das früh im Translationsprozess von der zellulären Maschinerie gebunden wird. Dies ermöglicht die korrekte Lokalisierung des Translationskomplexes im endoplasmatischen Retikulum, wo die Antikörperketten in den sekretorischen Weg für den Proteinaufbau und die Sekretion aus der Zelle eintreten können. Die Leader-Sequenz wird während des Proteinzusammenbauprozesses gespalten und ist kein Teil des endgültigen Proteins. Twist empfiehlt bei der Verwendung unserer pTwist-IgG-Expressionsvektoren die folgende Leader-Sequenz sowohl für die schwere als auch die leichte Kette, da diese Sequenzen mit unseren pTwist-Vektoren sowohl in Expi293™- als auch in ExpiCHO™-Zelllinien getestet und validiert wurden:

VH: MRAWIFFLLCLAGRALA

VL: MRAWIFFLLCLAGRALA

Untersuchungen haben gezeigt, dass C-terminale Lysinreste der schweren Kette (auf allen IgG-Isotypen vorhanden) abgespalten werden, sobald das IgG im Umlauf ist. Studien haben auch gezeigt, dass Lysin keine funktionelle Auswirkung hat, sobald es gespalten ist, und seine Anwesenheit tatsächlich hemmend darauf wirkt, dass der Antikörper sein volles Zytotoxizitätspotential erreichen kann: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4622059/

Bitte stellen Sie sicher, dass Sie das folgende Sequenzformat zum Hochladen variabler Regionen haben:

• Entferntes Signal-Leader-Peptid (bei Verwendung von pTwist-Vektoren + von Twist empfohlenes Signal-Leader-Peptid)
• Variable Regionen sollten nicht mit einer beliebigen CH1-Startsequenz enden
• Sequenzen sind durch drei teilbar, wenn Ihre ORF mit Ihrer Insertionsstelle übereinstimmt.

Dieses Cystein in einem vollständigen IgG bildet eine Disulfidbindung mit der konstanten LC-Region, die in dem VHH-Fc-Fusionskonstrukt nicht vorhanden ist.

Die Kozak-Sequenz leitet den Präinitiationskomplex (PIC) und das Ribosom zur Translationsinitiationsstelle (Startcodon) und vermittelt den Ribosomenaufbau, um sicherzustellen, dass die richtige Proteinsequenz translatiert wird.

Die Konsensus-Kozak-Sequenz wird allgemein als GCCGCCACCATGG angesehen, wobei ATG das Startcodon ist (typischerweise der Beginn der Signalsequenz). Twist empfiehlt die Version GCCGCCACC, und zwar dem Startcodon ATG vorgelagert.

Sie können zur Aufreinigung eine Protein-A- oder -G-Festphase verwenden, die je nach Spezies und Isotyp des IgG an die FC-Region der Antikörper bindet. Alternativ können Sie immobilisiertes Antigen (Volllängen- oder kurzes Peptidantigen) verwenden, um die Antikörper zu reinigen. Das Verfahren hängt von der nachgelagerten Anwendung und der Spezifität des Antikörpers ab.

Kunden können den Expressionsvektor pTwist CMV BG WPRE Neo auswählen, wenn sie ihre eigene Fc-Region-Sequenz (IgG3, Maus-IgG oder modifiziertes Fc) verwenden oder eine andere Art von Fc-Fusions-Antikörpern exprimieren möchten.

Bitte denken Sie daran, am Ende Ihrer Codierungssequenz ein Stoppcodon einzufügen. Wenn Sie Fragen zum Design haben, senden Sie bitte eine E-Mail an [email protected], um Hilfe bei Ihrer individuellen Anfrage zu erhalten.

Twist liefert klonale Gen-Glycerinvorräte aus den klonalen Genen, die für die Antikörperproduktion synthetisiert wurden. Während der Antikörperproduktion wird die DNA für die Transfektion konsumiert; Glycerinvorräte werden jedoch reserviert und zusammen mit den Antikörpern nach der Produktion geliefert. Bitte beachten Sie unser Protokoll zur Vorbereitung frischer DNA aus Glycerinvorräten. 

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Wenn Sie sich bezüglich der Preise an Ihren Kundenbetreuer wenden müssen, finden Sie die entsprechenden Kontaktinformationen in E-Commerce unter Konto.

Twist verwendet die Industriestandard-Zelllinien Thermo Fisher Scientific Expi293™ und Thermo Fisher Scientific ExpiCHO™.

Eine Leader- oder sekretorische Signalsequenz fungiert als Peptidsignal, das früh im Translationsprozess von der zellulären Maschinerie gebunden wird. Dies ermöglicht die korrekte Lokalisierung des Translationskomplexes im endoplasmatischen Retikulum, wo die Antikörperketten in den sekretorischen Weg für den Proteinaufbau und die Sekretion aus der Zelle eintreten können. Die Leader-Sequenz wird während des Proteinzusammenbauprozesses gespalten und ist kein Teil des endgültigen Proteins. Twist empfiehlt bei der Verwendung unserer pTwist-IgG-Expressionsvektoren die folgende Leader-Sequenz sowohl für die schwere als auch die leichte Kette, da diese Sequenzen mit unseren pTwist-Vektoren sowohl in Expi293™- als auch in ExpiCHO™-Zelllinien getestet und validiert wurden:

VH: MRAWIFFLLCLAGRALA

VL: MRAWIFFLLCLAGRALA

Untersuchungen haben gezeigt, dass C-terminale Lysinreste der schweren Kette (auf allen IgG-Isotypen vorhanden) abgespalten werden, sobald das IgG im Umlauf ist. Studien haben auch gezeigt, dass Lysin keine funktionelle Auswirkung hat, sobald es gespalten ist, und seine Anwesenheit tatsächlich hemmend darauf wirkt, dass der Antikörper sein volles Zytotoxizitätspotential erreichen kann: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4622059/

Bitte stellen Sie sicher, dass Sie das folgende Sequenzformat zum Hochladen variabler Regionen haben:

• Entferntes Signal-Leader-Peptid (bei Verwendung von pTwist-Vektoren + von Twist empfohlenes Signal-Leader-Peptid)
• Variable Regionen sollten nicht mit einer beliebigen CH1-Startsequenz enden
• Sequenzen sind durch drei teilbar, wenn Ihre ORF mit Ihrer Insertionsstelle übereinstimmt.

Dieses Cystein in einem vollständigen IgG bildet eine Disulfidbindung mit der konstanten LC-Region, die in dem VHH-Fc-Fusionskonstrukt nicht vorhanden ist.

Die Kozak-Sequenz leitet den Präinitiationskomplex (PIC) und das Ribosom zur Translationsinitiationsstelle (Startcodon) und vermittelt den Ribosomenaufbau, um sicherzustellen, dass die richtige Proteinsequenz translatiert wird.

Die Konsensus-Kozak-Sequenz wird allgemein als GCCGCCACCATGG angesehen, wobei ATG das Startcodon ist (typischerweise der Beginn der Signalsequenz). Twist empfiehlt die Version GCCGCCACC, und zwar dem Startcodon ATG vorgelagert.