Vorbereitung Ihrer Bestellung

1. Die Fragmentlänge kann zwischen 301–500 nt liegen (einschließlich konstanter Flanken).
2. Die Gesamtlänge des Fragments darf 500 Nukleotide nicht überschreiten, einschließlich der konstanten Flanken, die für die PCR-Amplifikation verwendet werden. Die flankierenden Sequenzen müssen mindestens 20–25 bp lang sein, was eine variable kodierende Region von bis zu 460 bp ermöglicht. 
3. Die Variation der Fragmentlängen vom kürzesten zum längsten Fragment sollte 80 bp nicht überschreiten (z. B. wenn das längste Fragment 400 bp ist, sollte das kürzeste Fragment mindestens 320 bp lang sein).

Ja, wir können Ihren Fragmenten Twist-Standard-Flanken hinzufügen, die für Restriktionsklonen geeignet sind.

Nein, wir können nur Sequenzen synthetisieren, die die vier Standardbasen A, C, G und T enthalten. Die Verwendung degenerierter Basen (R, Y, S, W, K, M, B, D, H, V, N) ist nicht gestattet. Wenn eine bestimmte Position im Fragment jedoch alle vier Basen (oder eine Teilmenge von Basen) aufweisen soll, können Sie separate Fragmente mit jeweils einer anderen Base an der gewünschten Stelle entwerfen.

Für MGF bestehen keine Komplexitätsanforderungen. Einige Eigenschaften können jedoch zu suboptimalen Ergebnissen führen:

1. Eigenschaften, wie direkte Wiederholungen und konservierte Sequenzen, die alle Varianten gemeinsam haben, können zu einer gewissen Rekombination während der Amplifikation führen.
2. Lange Homopolymere (>20 bp) können während der Amplifikation zu einem gewissen Dropout führen.
3. Starke Hairpins können eine schlechte Amplifikation zur Folge haben, was zu einer Unterrepräsentation oder zum Ausscheiden dieser Varianten führen kann.

Der Preis hängt vom Komplexitätsgrad (Poolgröße) und von dem Grad der Fragmentlänge (301–350 nt, 351–400 nt, 401–450 nt und 451–500 nt) ab.

Für Multiplex-Genfragmente beträgt die Bearbeitungszeit 8 bis 12 Werktage.

Bitte beachten Sie die Standardregeln für die Gestaltung des Primer-Designs:

1. Länge von 20 bis 25 bp
2. 35–70 % G/C-Gehalt
3. Schmelztemperatur (Tm) von 55 bis 60 °C
4. Primerpaare sollten eine Tm innerhalb von 5 °C voneinander haben.
5. Primerpaare sollten keine komplementären Regionen haben.
6. Vermeiden Sie interne Primerbindungsstellen in der variablen Region.

1. Die Kapillarelektrophorese wird mit dem endgültigen Pool durchgeführt, um die Reinheit der Probe zu bestimmen. Mindestens 90 % der Moleküle im Pool müssen innerhalb der erwarteten Länge liegen.
2. Die Fluoreszenz-basierte Quantifizierung wird an der endgültigen Probe durchgeführt, um sicherzustellen, dass mindestens 200 ng Material vorhanden sind.
3. Twist führt keine Sequenzierung anhand des Pools durch und garantiert keine Qualität in Bezug auf die Darstellung oder Fehlerrate. Wir haben jedoch während der Entwicklung festgestellt, dass die meisten Pools ein 90/10-Perzentil von < 3 und eine durchschnittliche Fehlerquote von ~1:2.000 haben.

Nein, alle Fragmente im Pool müssen die gleichen Flankensequenzen haben. Sie können mehrere Flankensätze bestellen, indem Sie mehrere Pools bestellen. Alternativ können Sie auch einen einzigen Pool mit unterschiedlichen internen Flanken und universellen externen Flanken gestalten, den Twist für die Amplifikation verwenden soll. Sie können dann die Subpools amplifizieren. Dies birgt jedoch das Risiko, dass die Einheitlichkeit verzerrt wird und/oder Ihnen das Vorlagenmaterial ausgeht.

Schritt 1: Laden Sie das MGF-Einreichungsformular herunter und füllen Sie alle Felder im Formular für Ihr MGF-Design aus.  

Schritt 2: Laden Sie das ausgefüllte Einreichungsformular hier hoch.  

Wenn Sie Probleme haben, kontaktieren Sie uns bitte per E-Mail ([email protected]) oder Chat.

1. Die Fragmentlänge kann zwischen 301–500 nt liegen (einschließlich konstanter Flanken).
2. Die Gesamtlänge des Fragments darf 500 Nukleotide nicht überschreiten, einschließlich der konstanten Flanken, die für die PCR-Amplifikation verwendet werden. Die flankierenden Sequenzen müssen mindestens 20–25 bp lang sein, was eine variable kodierende Region von bis zu 460 bp ermöglicht. 
3. Die Variation der Fragmentlängen vom kürzesten zum längsten Fragment sollte 80 bp nicht überschreiten (z. B. wenn das längste Fragment 400 bp ist, sollte das kürzeste Fragment mindestens 320 bp lang sein).

Ja, wir können Ihren Fragmenten Twist-Standard-Flanken hinzufügen, die für Restriktionsklonen geeignet sind.

Nein, wir können nur Sequenzen synthetisieren, die die vier Standardbasen A, C, G und T enthalten. Die Verwendung degenerierter Basen (R, Y, S, W, K, M, B, D, H, V, N) ist nicht gestattet. Wenn eine bestimmte Position im Fragment jedoch alle vier Basen (oder eine Teilmenge von Basen) aufweisen soll, können Sie separate Fragmente mit jeweils einer anderen Base an der gewünschten Stelle entwerfen.

Für MGF bestehen keine Komplexitätsanforderungen. Einige Eigenschaften können jedoch zu suboptimalen Ergebnissen führen:

1. Eigenschaften, wie direkte Wiederholungen und konservierte Sequenzen, die alle Varianten gemeinsam haben, können zu einer gewissen Rekombination während der Amplifikation führen.
2. Lange Homopolymere (>20 bp) können während der Amplifikation zu einem gewissen Dropout führen.
3. Starke Hairpins können eine schlechte Amplifikation zur Folge haben, was zu einer Unterrepräsentation oder zum Ausscheiden dieser Varianten führen kann.

Der Preis hängt vom Komplexitätsgrad (Poolgröße) und von dem Grad der Fragmentlänge (301–350 nt, 351–400 nt, 401–450 nt und 451–500 nt) ab.

Für Multiplex-Genfragmente beträgt die Bearbeitungszeit 8 bis 12 Werktage.

Bitte beachten Sie die Standardregeln für die Gestaltung des Primer-Designs:

1. Länge von 20 bis 25 bp
2. 35–70 % G/C-Gehalt
3. Schmelztemperatur (Tm) von 55 bis 60 °C
4. Primerpaare sollten eine Tm innerhalb von 5 °C voneinander haben.
5. Primerpaare sollten keine komplementären Regionen haben.
6. Vermeiden Sie interne Primerbindungsstellen in der variablen Region.

1. Die Kapillarelektrophorese wird mit dem endgültigen Pool durchgeführt, um die Reinheit der Probe zu bestimmen. Mindestens 90 % der Moleküle im Pool müssen innerhalb der erwarteten Länge liegen.
2. Die Fluoreszenz-basierte Quantifizierung wird an der endgültigen Probe durchgeführt, um sicherzustellen, dass mindestens 200 ng Material vorhanden sind.
3. Twist führt keine Sequenzierung anhand des Pools durch und garantiert keine Qualität in Bezug auf die Darstellung oder Fehlerrate. Wir haben jedoch während der Entwicklung festgestellt, dass die meisten Pools ein 90/10-Perzentil von < 3 und eine durchschnittliche Fehlerquote von ~1:2.000 haben.

Nein, alle Fragmente im Pool müssen die gleichen Flankensequenzen haben. Sie können mehrere Flankensätze bestellen, indem Sie mehrere Pools bestellen. Alternativ können Sie auch einen einzigen Pool mit unterschiedlichen internen Flanken und universellen externen Flanken gestalten, den Twist für die Amplifikation verwenden soll. Sie können dann die Subpools amplifizieren. Dies birgt jedoch das Risiko, dass die Einheitlichkeit verzerrt wird und/oder Ihnen das Vorlagenmaterial ausgeht.

Schritt 1: Laden Sie das MGF-Einreichungsformular herunter und füllen Sie alle Felder im Formular für Ihr MGF-Design aus.  

Schritt 2: Laden Sie das ausgefüllte Einreichungsformular hier hoch.  

Wenn Sie Probleme haben, kontaktieren Sie uns bitte per E-Mail ([email protected]) oder Chat.