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Twist TrueAmp Polymerase wurde für die NGS-Library-Amplifikation entwickelt und liefert eine gleichmäßige Abdeckung über GC-Extreme, hohe Empfindlichkeit bei geringem Input und automatisierbare Hot-Start-Leistung.
Produktblatt
Protokoll
Produktdaten
Geringe Verzerrung bei der Amplifikation über GC-Extreme hinweg
TrueAmp gewährleistet eine gleichbleibende Abdeckung, wo es bei anderen zum Dropout kommt, senkt die Sequenzierungskosten und erhält schwierige Zielsequenzen.
Effiziente und robuste Ausbeuten bei geringen Eingabemengen
Dank verbesserter Effizienz erreicht TrueAmp die gewünschte Ausbeute in weniger Zyklen, sodass zyklusbedingte Artefakte vermieden werden können. Sie bietet zuverlässige Ergebnisse für Librarys mit geringer Ausbeute, die typisch für die Post-Capture-PCR sind.
Hohe Präzision und reduzierte Artefakte
Diese speziell entwickelte DNA-Polymerase mit Proofreading-Funktion reduziert C→T-Fehleinbau, die oft durch Cytosin-Desaminierung verursacht werden, und begrenzt den Replikationsschlupf über lange Homopolymere – entscheidend für die Erkennung sensibler Varianten.
Bead-Toleranz für zuverlässige PCR
Magnetische Beads werden häufig zur Reinigung und Größenselektion verwendet, können jedoch die PCR hemmen und die Ausbeute verringern.
Abbildung 1. GC-normalisierte Abdeckung; AT-reiche C. difficile und GC-reiche B. pertussis.
Abbildung 2. Serielle Verdünnungen von 1 ng bis 100 fg, QK mit Qubit und TapeStation.
Abbildung 3. Substitutionsraten nach Einbau von > 7 Mio. Basen; Homopolymer-Auslesung unter Verwendung von klonalen Plasmiden von Twist.
Abbildung 4. Toleranz gegenüber paramagnetischen Beads während der PCR. PCR-Reaktionen wurden mit 6,25 μl, 12,5 μl, 25 μl und 50 μl MyOne T1 Beads, M270 Beads (Invitrogen) und Twist DNA-Aufreinigungs-Beads versetzt. Die Reaktionsausbeuten wurden nach der Entfernung der Beads aufgereinigt und mit dem Qubit dsDNA Broad Range Assay quantifiziert.
Geringe Verzerrung bei der Amplifikation über GC-Extreme hinweg
TrueAmp gewährleistet eine gleichbleibende Abdeckung, wo es bei anderen zum Dropout kommt, senkt die Sequenzierungskosten und erhält schwierige Zielsequenzen.
Abbildung 1. GC-normalisierte Abdeckung; AT-reiche C. difficile und GC-reiche B. pertussis.
Effiziente und robuste Ausbeuten bei geringen Eingabemengen
Dank verbesserter Effizienz erreicht TrueAmp die gewünschte Ausbeute in weniger Zyklen, sodass zyklusbedingte Artefakte vermieden werden können. Sie bietet zuverlässige Ergebnisse für Librarys mit geringer Ausbeute, die typisch für die Post-Capture-PCR sind.
Abbildung 2. Serielle Verdünnungen von 1 ng bis 100 fg, QK mit Qubit und TapeStation.
Hohe Präzision und reduzierte Artefakte
Diese speziell entwickelte DNA-Polymerase mit Proofreading-Funktion reduziert C→T-Fehleinbau, die oft durch Cytosin-Desaminierung verursacht werden, und begrenzt den Replikationsschlupf über lange Homopolymere – entscheidend für die Erkennung sensibler Varianten.
Abbildung 3. Substitutionsraten nach Einbau von > 7 Mio. Basen; Homopolymer-Auslesung unter Verwendung von klonalen Plasmiden von Twist.
Bead-Toleranz für zuverlässige PCR
Magnetische Beads werden häufig zur Reinigung und Größenselektion verwendet, können jedoch die PCR hemmen und die Ausbeute verringern.
Abbildung 4. Toleranz gegenüber paramagnetischen Beads während der PCR. PCR-Reaktionen wurden mit 6,25 μl, 12,5 μl, 25 μl und 50 μl MyOne T1 Beads, M270 Beads (Invitrogen) und Twist DNA-Aufreinigungs-Beads versetzt. Die Reaktionsausbeuten wurden nach der Entfernung der Beads aufgereinigt und mit dem Qubit dsDNA Broad Range Assay quantifiziert.
Optimierte Amplifikationstechnologie, um die Komplexität der Library zu bewahren
Viele PCR-Enzyme sind für die Anwendung mit spezifischen Amplicons optimiert (qPCR, Klonierung) und nicht für komplexe NGS-Librarys.
Ein neuer Ansatz mit TrueAmp
Diese speziell entwickelte DNA-Polymerase mit Proofreading-Funktion und hoher Prozessierbarkeit bietet höchste GC-Gleichmäßigkeit, Ausbeute und Genauigkeit für die Library-Amplifikation.
Das Ergebnis
Weniger Verzerrungen bei kurzen, GC-neutralen Molekülen und mehr nutzbare Daten pro Durchlauf.
Wichtigste Merkmale
- check Single-tube 2x mastermix simplifies setup and reduces handling errors
- Geeignet für die Amplifikation vor und nach der Erfassung
- Für Hybridisierungsworkflows am selben Tag oder über Nacht mit Twist TE Kits konzipiert
- Validiert mit Twist Reagenzien für Libraryvorbereitung und Target Enrichment, um durchgängig konsistente Leistung zu gewährleisten
Product Sheet
Verwandte Workflows und Anwendungen
Target Enrichment-Workflow
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Twist Bioscience HQ
681 Gateway Blvd
South San Francisco, CA 94080, USA
