Was sind die Anforderungen für meinen kundenspezifischen Vektor?

Stellen Sie sicher, dass Ihr Vektor die folgenden Anforderungen erfüllt:

  • Vektorvolumen ≥ 100 ul (Plasmidmaterial kann nicht auf Filterpapier eingereicht werden)
  • Vektorkonzentration ≥ 100 ng/ul
  • Vektormasse 10 ug
  • muss bakteriellen Replikationsursprung haben (keine niedrige Kopie)
  • muss klonale Zellpopulation sein
  • muss zirkulär sein
  • muss Antibiotikaresistenzmarker aufweisen
  • darf keine Homopolymere/repetitive Sequenz von > 9 bp innerhalb von 40 bp von der Insertionsstelle enthalten
  • Wiederholungen: muss mindestens 40 bp einer eindeutigen Sequenz ohne direkte oder invertierte Wiederholungen von > 19 bp, der Insertionsstelle vor- und nachgelagert, enthalten
  • darf kein ccdB im endgültigen Genprodukt enthalten
  • muss in der Lage sein, innerhalb von 50 bp von der Insertionsstelle nach Restriktionsenzymstelle zu linearisieren
  • muss BSL-1-konform sein

Antibiotikaresistenz:

Plasmid muss einen der folgenden Antibiotikaresistenzmarker für E. coli enthalten. Standardkonzentrationen sind aufgeführt:

Antibiotikum  

In der Produktion verfügbare Standardkonzentration (ug/ml)

Kan

50

AMP

100

CHLOR

25

APRA

50

SPEC

100

TET

10

ZEO

50

BLAST

100

Zelllinien (E. coli)       

  • in der Produktion verfügbare Zelllinie        
  • Klonierungsstamm ähnlich DH10Beta   
  • Stbl3-ähnlicher Stamm (kann bei 37 ℃ gezüchtet werden)        

Kopienummer              

Es sind nur konstitutive Replikationsursprünge zulässig.

Twist Definition

Akzeptiert

Beispiel

Hoch

Ja

ColE1/pMB1/pBR322/pUC

Mittel

Ja, reduzierte Miniprep-Ausbeute

p15A

Niedrig

Nein

pSC101

Wachstumsbedingungen     

  • Standardtemperatur: 37 ℃/30 ℃   
  • Standardzeit: Über Nacht/24 Std.         
  • Beschichtete Kolonien müssen nach 16 Stunden/24 Stunden Wachstum auf LB-Lennox eine automatisierungsfreundliche Größe erreichen.

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