Twist liefert klonale Gen-Glycerinvorräte aus den klonalen Genen, die für die Antikörperproduktion synthetisiert wurden. Während der Antikörperproduktion wird die DNA für die Transfektion konsumiert; Glycerinvorräte werden jedoch reserviert und zusammen mit den Antikörpern nach der Produktion geliefert. Bitte beachten Sie unser Protokoll zur Vorbereitung frischer DNA aus Glycerinvorräten. 

Eine Leader- oder sekretorische Signalsequenz fungiert als Peptidsignal, das früh im Translationsprozess von der zellulären Maschinerie gebunden wird. Dies ermöglicht die korrekte Lokalisierung des Translationskomplexes im endoplasmatischen Retikulum, wo die Antikörperketten in den sekretorischen Weg für den Proteinaufbau und die Sekretion aus der Zelle eintreten können. Die Leader-Sequenz wird während des Proteinzusammenbauprozesses gespalten und ist kein Teil des endgültigen Proteins. Twist empfiehlt bei der Verwendung unserer pTwist-IgG-Expressionsvektoren die folgende Leader-Sequenz sowohl für die schwere als auch die leichte Kette, da diese Sequenzen mit unseren pTwist-Vektoren sowohl in Expi293™- als auch in ExpiCHO™-Zelllinien getestet und validiert wurden:

VH: MRAWIFFLLCLAGRALA

VL: MRAWIFFLLCLAGRALA

Die Kozak-Sequenz leitet den Präinitiationskomplex (PIC) und das Ribosom zur Translationsinitiationsstelle (Startcodon) und vermittelt den Ribosomenaufbau, um sicherzustellen, dass die richtige Proteinsequenz translatiert wird.

Die Konsensus-Kozak-Sequenz wird allgemein als GCCGCCACCATGG angesehen, wobei ATG das Startcodon ist (typischerweise der Beginn der Signalsequenz). Twist empfiehlt die Version GCCGCCACC, und zwar dem Startcodon ATG vorgelagert.

Sie können zur Aufreinigung eine Protein-A- oder -G-Festphase verwenden, die je nach Spezies und Isotyp des IgG an die FC-Region der Antikörper bindet. Alternativ können Sie immobilisiertes Antigen (Volllängen- oder kurzes Peptidantigen) verwenden, um die Antikörper zu reinigen. Das Verfahren hängt von der nachgelagerten Anwendung und der Spezifität des Antikörpers ab.

Twist verwendet die Industriestandard-Zelllinien Thermo Fisher Scientific Expi293™ und Thermo Fisher Scientific ExpiCHO™.

Kunden können den Expressionsvektor pTwist CMV BG WPRE Neo auswählen, wenn sie ihre eigene Fc-Region-Sequenz (IgG3, Maus-IgG oder modifiziertes Fc) verwenden oder eine andere Art von Fc-Fusions-Antikörpern exprimieren möchten.

Bitte denken Sie daran, am Ende Ihrer Codierungssequenz ein Stoppcodon einzufügen. If you have any design questions, please email igg@twistbioscience.com for help with your custom request

Untersuchungen haben gezeigt, dass C-terminale Lysinreste der schweren Kette (auf allen IgG-Isotypen vorhanden) abgespalten werden, sobald das IgG im Umlauf ist. Studien haben auch gezeigt, dass lysin keine funktionelle auswirkung hat, sobald es gespalten ist, und seine anwesenheit tatsächlich hemmend darauf wirkt, dass der antikörper sein volles zytotoxizitätspotential erreichen kann: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4622059/

Dieses Cystein in einem vollständigen IgG bildet eine Disulfidbindung mit der konstanten LC-Region, die in dem VHH-Fc-Fusionskonstrukt nicht vorhanden ist.

Bitte stellen Sie sicher, dass Sie das folgende Sequenzformat zum Hochladen variabler Regionen haben:

• Entferntes Signal-Leader-Peptid (bei Verwendung von pTwist-Vektoren + von Twist empfohlenes Signal-Leader-Peptid)
• Variable Regionen sollten nicht mit einer beliebigen CH1-Startsequenz enden
• Sequenzen sind durch drei teilbar, wenn Ihre ORF mit Ihrer Insertionsstelle übereinstimmt.

You can find the pricing table for our custom antibody products in your account by clicking here.

If you need to contact your Account Manager regarding pricing, their contact information is available in eCommerce under Account.

Wir verwenden im Handel erhältliches PBS; bitte teilen Sie dem Kunden auf Anfrage Kataloginformationen mit:

• PBS 7.4 Katalog-Nr. 21-031-CM Corning
• PBS 6.0 Katalog-Nr. P1760 Teknova

Twist untersucht jedes Antikörperprodukt unter reduzierenden Bedingungen auf Ausbeute (μg), Reinheit (%) und Größe (kDa). Jeder Antikörper wird mittels LabChip (CE-SDS) auf Reinheit und Größe der einzelnen schweren und leichten Ketten untersucht. Ausbeuten werden unter Verwendung von A280-Ablesungen quantifiziert. Überstehende Proben werden unter Verwendung eines Titerbestimmungsverfahrens quantifiziert. In der endgültigen Dokumentation werden für jeden gereinigten Antikörper zusätzlich zu der prozentualen Reinheit und der Größe der schweren Kette und der leichten Kette Volumen-, Ausbeute- und Konzentrationswerte angegeben. Die Überstandsdokumentation liefert Antikörpertiter-Expressionsniveaus von entweder niedrigen, mittleren oder hohen Expressionsniveaus.

1 ml = ~220 ul Volumen, 15–300 µg

8 ml = ~750 ul Volumen, 15–3000 µg

• 96-Deep-Well-Platten – kundenspezifische Plattenanordnungen erhältlich
• 1,4-ml-Mikronröhrchen-Racks
• 2-ml-Röhrchen
• 4-ml-Röhrchen
• 10-ml-Röhrchen (nur für 8-ml-Überstand)