Das jüngste Aufkommen genetischer Werkzeuge wie Perturb-seq, das gepoolte CRISPR-Analysen mit der Einzelzell-RNA-Sequenzierung kombiniert, hat beispiellose Einblicke in die Genfunktion von Säugetieren und genregulatorische Netzwerke geliefert. Gegenwärtige Implementierungen dieser Werkzeuge unterliegen jedoch technischen und praktischen Grenzen, die ihre Verwendung einschränken. Um diese Herausforderungen zu bewältigen, haben Forscher der University of California in San Francisco, der Princeton University und von 10x Genomics Perturb-seq entwickelt, ein Verfahren, mit dem Untersuchungen zu genetischen Interaktionen mit wesentlich höherem Durchsatz durchgeführt werden können. Darüber hinaus ist durch die Hinzufügung einer auf Hybridisierung basierenden Target Enrichment-Methode jetzt eine empfindliche und spezifische Sequenzierung von biologisch bedeutsamen Transkriptionsfeldern möglich, wodurch die experimentellen Kosten erheblich gesenkt werden. In this webinar you will… Learn how Perturb-seq, which combines pooled CRISPR screens with single-cell RNA-sequencing, facilitates unbiased exploration of gene function and delineation of genetic regulatory networks. Erfahren Sie mehr über die jüngste Innovation von Perturb-seq mit Direct-Capture-Verfahren, die den Screening-Durchsatz erheblich erhöht und den Umfang und die Flexibilität dieser Technologie erheblich erweitert. Verstehen Sie, wie das Targeting einzelner Gene mit mehreren sgRNAs pro Zelle die Wirksamkeit der CRISPR-Interferenz und -Aktivierung verbessert und die Verwendung kompakter, hochaktiver CRISPR-Libraries für Einzelzell-Screenings erleichtert. Erfahren Sie, wie durch hybridisierungsbasiertes Target Enrichment die Sequenzierungskosten für relevante Transkripte um bis zu 90 % gesenkt werden können. Erfahren Sie, wie die Skalierbarkeit und Genauigkeit der CRISPR Oligo-Pools und NGS-Zielanreicherungs-Lösungen von Twist die Entwicklung und Anwendung dieser bahnbrechenden Technologie unterstützt.

Nach der Entschlüsselung des Genoms wurden zahlreiche groß angelegte, genzentrierte Target-Entdeckungsstudien mit Werkzeugen wie RNAi und CRISPR durchgeführt, die viele Erkenntnisse über die Krankheitsbiologie geliefert haben. Es bleiben jedoch Herausforderungen, da diese Instrumente häufig Schwierigkeiten haben, die subtilen biologischen Prozesse abzufragen, die das klinische Ansprechen bestimmen. Glücklicherweise gibt es neue Screening-Tools, mit denen sowohl Targets gefunden als auch die Mechanismen aufgedeckt werden können, die komplexe molekulare Wechselwirkungen modulieren. One such tool is SITESEEKER®, developed by the scientists at PhoreMost.  In this webinar you will: Erfahren Sie, wie SITESEEKER® die Proteininterferenz (PROTEINi) nutzt, um eine wesentlich größere Komplexität als bei vorhandenen Screening-Tools zu erzielen. Sehen Sie, wie der Weg von der Target-ID zur Arzneimittelentwicklung mithilfe von PROTEINi verkürzt werden kann, indem zusätzlich zu den Zielen auch krankheitsassoziierte Taschen entdeckt werden. Entdecken Sie, wie diese Technologie in wichtigen Krankheitsbereichen eingesetzt werden kann, einschließlich in der Krebsbiologie, der Neurodegeneration und beim gezielten Proteinabbau. Erfahren Sie, warum PhoreMost aufgrund der Länge und Genauigkeit von Twist Oligo Pools in der Lage ist, die nächste Generation seiner Plattform zu entwickeln.

Das funktionelle genetische Screening unter Verwendung des CRISPR/Cas9-Systems ist ein leistungsfähiges Instrument zur Interrogation der Genfunktion in großem Maßstab. Der Zugang zu und die Implementierung dieser Technologie werden jedoch durch vorhandene vordefinierte CRISPR-sgRNA-Libraries eingeschränkt. Hier wurde ein einzelner Twist Oligo Pool in Kombination mit Custom Library Multiplexed Cloning (CLUE; crispr-clue.de), einem benutzerfreundlichen Bioinformatik- und Wet-Lab-Workflow, verwendet, um zahlreiche hochwertige, benutzerdefinierte sgRNA-Libraries zu generieren. Die außergewöhnliche Genauigkeit von Twist Oligo Pools bewahrt die einheitliche Darstellung von sgRNAs in den resultierenden CLUE-Libraries ohne Library-übergreifende Kontamination und erfüllt die strengen Anforderungen für den Erfolg bei CRISPR-Analyseanwendungen.