Introducción
El proceso de caracterización de variantes de anticuerpos, que es de bajo rendimiento y requiere numerosos recursos, puede suponer un costoso cuello de botella en la línea de descubrimiento. La producción de anticuerpos de alto rendimiento de Twist es un flujo de trabajo de gen a proteína que alivia este cuello de botella produciendo decenas de miles de diferentes anticuerpos para el cribado de propiedades biofísicas y farmacocinéticas. La plataforma de síntesis de ADN basada en el silicio de Twist puede escribir de forma precisa miles de genes por ciclo, lo que permite la producción rápida y de alto rendimiento de anticuerpos para el descubrimiento y el cribado.
Especificaciones del producto
- Anticuerpos proporcionados como proteína purificada o sobrenadante
- Todos los isotipos de IgG disponibles: IgG1, IgG2, IgG4, Kappa y Lambda de cadena ligera, y VHH-Fc (IgG1 e IgG2)
- Los rendimientos van de 15 μg a 2000 μg
- Anticuerpos expresados en las células HEK-293
¿Necesita expandir su capacidad de producir anticuerpos para el cribado?
La producción de anticuerpos de alto rendimiento de Twist permite la expansión inmediata de la línea de producción de anticuerpos. Solo tiene que cargar las secuencias de anticuerpos que necesita y dejar que Twist haga el resto.
Introducción
El proceso de caracterización de variantes de anticuerpos, que es de bajo rendimiento y requiere numerosos recursos, puede suponer un costoso cuello de botella en la línea de descubrimiento. La producción de anticuerpos de alto rendimiento de Twist es un flujo de trabajo de gen a proteína que alivia este cuello de botella produciendo decenas de miles de diferentes anticuerpos para el cribado de propiedades biofísicas y farmacocinéticas. La plataforma de síntesis de ADN basada en el silicio de Twist puede escribir de forma precisa miles de genes por ciclo, lo que permite la producción rápida y de alto rendimiento de anticuerpos para el descubrimiento y el cribado.
Especificaciones del producto
- Anticuerpos proporcionados como proteína purificada o sobrenadante
- Todos los isotipos de IgG disponibles: IgG1, IgG2, IgG4, Kappa y Lambda de cadena ligera, y VHH-Fc (IgG1 e IgG2)
- Los rendimientos van de 15 μg a 2000 μg
- Anticuerpos expresados en las células HEK-293
¿Necesita expandir su capacidad de producir anticuerpos para el cribado?
La producción de anticuerpos de alto rendimiento de Twist permite la expansión inmediata de la línea de producción de anticuerpos. Solo tiene que cargar las secuencias de anticuerpos que necesita y dejar que Twist haga el resto.
En la línea de desarrollo de anticuerpos, los investigadores suelen experimentar un cuello de botella al pasar de los ciclos de selección por afinidad a la caracterización de anticuerpos. La naturaleza de alto rendimiento de las tecnologías, como la visualización de fagos y la secuenciación de linfocitos B únicos, posibilita la identificación de cientos de miles de anticuerpos potencialmente de alta afinidad para el desarrollo. Un estudio más exhaustivo de estos resultados positivos requiere su expresión como anticuerpos de longitud completa, un proceso que suele ser de bajo rendimiento y requerir muchos recursos, y esto es un obstáculo importante al progreso.
La producción de anticuerpos de alto rendimiento de Twist alivia este cuello de botella al aprovecha la experiencia de Twist en la síntesis de ADN y producción de anticuerpos automáticas para producir de forma simultánea miles de anticuerpos diferentes para el cribado y descubrimiento. Con una producción de alto rendimiento de anticuerpos en cantidades que van de los 15 µg a los 2000 µg, suficiente para identificar candidatos para un estudio posterior, Twist proporciona un producto de calidad superior sin un precio superior. Twist utiliza el sistema de expresión transitoria de HEK-293, que es el caballo de tiro del sector, para unos rendimientos sólidos, reproducibles y escalables. Debido a que los rendimientos de la expresión pueden variar dependiendo de la secuencia de anticuerpos, Twist utiliza y comunica los resultados de las secuencias de control para proporcionar la confianza de que la transfección y la producción de proteínas funcionan correctamente.
A continuación, se muestra un diagrama de caja en el que se muestran los rendimientos típicos de las proteínas de la producción de anticuerpos de alto rendimiento de Twist en el período de un mes. En resumen, un anticuerpo de control se expresó de forma recombinante en células HEK-293 transitorias por la transfección de dos genes clonados con la codificación de una cadena ligera y una pesada correspondientes. Tras la transfección, las células se cultivaron durante cuatro días, se centrifugaron brevemente y los sobrenadantes se decantaron en columnas de purificación de proteínas A/G. A continuación, se realizó una cuantificación A280. Estos datos destacan la calidad que se puede esperar del flujo de trabajo de producción de anticuerpos de alto rendimiento de Twist.
Para garantizar que los anticuerpos estén listos para la experimentación nada más recibirlos, el control de calidad (CC) de anticuerpos purificados incluye la cuantificación A280, el tamaño (kDa) y el análisis de porcentaje de pureza con un análisis de electroforesis capilar con dodecilsulfato de sodio (CE-SDS). Tras superar el CC, el anticuerpo está preparado para su envío, a menos que se haya solicitado un cambio de tampón o la normalización del volumen.
A continuación, se muestran los resultados de CC típicos generados mediante el flujo de trabajo de producción de anticuerpos de alto rendimiento de Twist. Los picos limpios en (A) y las bandas limpias en (B) muestran que las especies en las reservas de anticuerpos son todos de un tamaño y una carga similares. El pico en 67 kD representa el segmento de cadena pesada del anticuerpo, mientras que el pico en 29 representa los segmentos de cadena ligera.
Se sigue el protocolo canónico para Protein Express LabChip con el fin de preparar muestras desnaturalizadas para el tamaño y el análisis de la pureza. Se ejecuta el análisis de electroforesis capilar con dodecilsulfato de sodio (CE-SDS) para recopilar datos sobre el tamaño en comparación con un patrón de tamaños, similar a un gel SDS-PAGE, para proporcionar el peso molecular aproximado (kDa), así como la pureza porcentual de las cadenas pesadas y ligeras.
En la línea de desarrollo de anticuerpos, los investigadores suelen experimentar un cuello de botella al pasar de los ciclos de selección por afinidad a la caracterización de anticuerpos. La naturaleza de alto rendimiento de las tecnologías, como la visualización de fagos y la secuenciación de linfocitos B únicos, posibilita la identificación de cientos de miles de anticuerpos potencialmente de alta afinidad para el desarrollo. Un estudio más exhaustivo de estos resultados positivos requiere su expresión como anticuerpos de longitud completa, un proceso que suele ser de bajo rendimiento y requerir muchos recursos, y esto es un obstáculo importante al progreso.
La producción de anticuerpos de alto rendimiento de Twist alivia este cuello de botella al aprovecha la experiencia de Twist en la síntesis de ADN y producción de anticuerpos automáticas para producir de forma simultánea miles de anticuerpos diferentes para el cribado y descubrimiento. Con una producción de alto rendimiento de anticuerpos en cantidades que van de los 15 µg a los 2000 µg, suficiente para identificar candidatos para un estudio posterior, Twist proporciona un producto de calidad superior sin un precio superior. Twist utiliza el sistema de expresión transitoria de HEK-293, que es el caballo de tiro del sector, para unos rendimientos sólidos, reproducibles y escalables. Debido a que los rendimientos de la expresión pueden variar dependiendo de la secuencia de anticuerpos, Twist utiliza y comunica los resultados de las secuencias de control para proporcionar la confianza de que la transfección y la producción de proteínas funcionan correctamente.
A continuación, se muestra un diagrama de caja en el que se muestran los rendimientos típicos de las proteínas de la producción de anticuerpos de alto rendimiento de Twist en el período de un mes. En resumen, un anticuerpo de control se expresó de forma recombinante en células HEK-293 transitorias por la transfección de dos genes clonados con la codificación de una cadena ligera y una pesada correspondientes. Tras la transfección, las células se cultivaron durante cuatro días, se centrifugaron brevemente y los sobrenadantes se decantaron en columnas de purificación de proteínas A/G. A continuación, se realizó una cuantificación A280. Estos datos destacan la calidad que se puede esperar del flujo de trabajo de producción de anticuerpos de alto rendimiento de Twist.
Para garantizar que los anticuerpos estén listos para la experimentación nada más recibirlos, el control de calidad (CC) de anticuerpos purificados incluye la cuantificación A280, el tamaño (kDa) y el análisis de porcentaje de pureza con un análisis de electroforesis capilar con dodecilsulfato de sodio (CE-SDS). Tras superar el CC, el anticuerpo está preparado para su envío, a menos que se haya solicitado un cambio de tampón o la normalización del volumen.
A continuación, se muestran los resultados de CC típicos generados mediante el flujo de trabajo de producción de anticuerpos de alto rendimiento de Twist. Los picos limpios en (A) y las bandas limpias en (B) muestran que las especies en las reservas de anticuerpos son todos de un tamaño y una carga similares. El pico en 67 kD representa el segmento de cadena pesada del anticuerpo, mientras que el pico en 29 representa los segmentos de cadena ligera.
Se sigue el protocolo canónico para Protein Express LabChip con el fin de preparar muestras desnaturalizadas para el tamaño y el análisis de la pureza. Se ejecuta el análisis de electroforesis capilar con dodecilsulfato de sodio (CE-SDS) para recopilar datos sobre el tamaño en comparación con un patrón de tamaños, similar a un gel SDS-PAGE, para proporcionar el peso molecular aproximado (kDa), así como la pureza porcentual de las cadenas pesadas y ligeras.
