Kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática 2.0

The on-target rate for the Twist EF 2.0 Library Prep Kit is equivalent to the on-target rate achieved with the Twist EF 1.0 Library Prep Kit. Aquí se muestra una comparación de la fracción de activaciones en el objetivo en distintas condiciones de hibridación.

El enriquecimiento del objetivo se realizó con el panel de exoma nuclear Twist y el sistema de adaptador universal Twist. La secuenciación se realizó en plataformas NextSeq® 550 o 2000. Se submuestrearon los datos a 150x el tamaño del objetivo y se analizaron mediante las métricas de Picard. Las barras de error representan la desviación estándar entre réplicas.

During library preparation, minimizing inappropriate DNA ligation or recombination reduces chimera-derived sequencing errors. The upgraded Twist EF 2.0 Library Prep Kit provides a significantly decreased fraction of chimera reads, shown here against the Twist EF 1.0 Library Prep Kit. It also shows equivalent chimera rates compared to library preparation with mechanical fragmentation.

NGS libraries were generated with the Twist EF 1.0 Library Prep Kit, Twist EF 2.0 Library Prep Kit, or Twist Mechanical Fragmentation Library Prep Kit. El enriquecimiento del objetivo se realizó con el panel de exoma nuclear Twist y el sistema de adaptador universal Twist. La secuenciación se realizó en una plataforma NextSeq® 2000. Se submuestrearon los datos a 150x el tamaño del objetivo y se comunicó la métrica Picard PCT_CHIMERAS. Las barras de error representan la desviación estándar entre réplicas.

El rendimiento repetible garantiza la confianza en los resultados. When experimental conditions are held constant, the Twist EF 2.0 Library Prep Kit produces a robust, consistent DNA library fragment size. Aquí se muestran 8 electroferogramas diferentes de bibliotecas de secuenciación de última generación (NGS) generadas con el kit. La superposición de las curvas fluorescente demuestra la coherencia en la preparación de bibliotecas que puede alcanzarse de un ciclo a otro.

NGS libraries were generated with the Twist EF 2.0 Library Prep Kit and Twist's Universal Adapter system. 50 ng of high-quality gDNA was fragmented for 20 minutes at 37°C. 6 cycles of PCR were utilized for amplification. Las muestras se analizaron con el análisis Agilent DNA 7500 y los resultados se superpusieron en el software Expert 2100.

With the Twist EF 2.0 Library Prep Kit, DNA library fragment size can be tuned to your specific needs by simply adjusting fragmentation time.

Aquí se muestran los cuatro electroferogramas de las bibliotecas de NGS generadas con distintos tiempos de fragmentación. NGS libraries were generated with the Twist EF 2.0 Library Prep Kit and Twist's Universal Adapter System. 50 ng of high-quality gDNA was fragmented for various times at 37°C. 6 cycles of PCR were utilized for amplification. Samples were analyzed with an Agilent DNA 7500 assay, and results were overlaid in Expert 2100 software.

Los errores durante la amplificación son inevitables, pero no tienen que ser comunes. The upgraded Twist EF 2.0 Library Prep Kit includes the Equinox Master Mix, featuring a high-fidelity hot-start enzyme. En comparación con la polimerasa previamente recomendada y de uso común, la mezcla maestra Equinox demuestra una tasa de error menor con menos bases mal incorporadas. Esto supone una amplificación más precisa y, en última instancia, datos de secuenciación fiables.

Los casos de bases mal incorporadas en numerosas parejas de bases mal emparejadas se midieron con un análisis patentado basado en la NGS. Los valores presentados representan una tasa de error media de todos los casos de incorporaciones incorrectas.