En quoi le traitement diffère-t-il lorsque mon gène est fourni sur une plaque au lieu d’être livré dans un tube ?

Il n’y a pas de différence dans la fabrication de votre gène, ni d’avantage ou inconvénient en termes de qualité : ce n’est qu’une question de préférence. Certains clients préfèrent les tubes aux plaques parce qu’ils se conforment mieux à leurs exigences de stockage. D’autres clients préfèrent les plaques parce qu’elles permettent un processus à haut débit. Les commandes comportant 10 gènes ou plus se verront appliquer un montant forfaiture supplémentaire de 50 $ si des tubes sont demandés.  


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Dois-je inclure des sites de restriction ou des protubérances sur mes séquences ?

En ce qui concerne les fragments de gènes (avec ou sans adaptateurs), vous voudrez peut-être ajouter vos propres sites de restriction aux extrémités de chaque segment afin de pouvoir facilement cloner le fragment dans le vecteur de votre choix.

Pour les gènes clonaux, envoyez simplement les séquences d’inserts uniques que vous voulez que nous clonions dans le squelette de vecteur. Nous utilisons une méthode de clonage exclusive basée sur l’homologie pour assembler nos gènes clonaux et nous concevons et ajoutons les séquences saillantes d’homologues pour vous. Vous n’avez pas besoin de tenir compte de notre stratégie de clonage lorsque vous concevez votre insert. 

Veuillez noter que nos vecteurs de clonage ne comportent pas de sites de restriction flanquant directement l’insert. Cela permet une totale flexibilité dans la conception. Vous pouvez donc ajouter les sites de restriction souhaités sur les flancs de votre insert à utiliser dans votre processus en aval.

Nos points d’insertion de vecteur d’expression sont signalés par deux sites de restriction qui seront intégralement préservés et flanqueront votre insert dans la construction finale. Nous conseillons aux clients de vérifier les séquences de la construction finale en cliquant sur le bouton « Télécharger des séquences » dans l’outil de conception. Une fois la commande envoyée à la fabrication, elle ne peut plus être modifiée.

 

 


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Comment Twist teste-t-elle la qualité de la synthèse de gène ?

Tous nos produits de synthèse de gènes clonaux sont vérifiés par séquence de NGS.

Les fragments de gènes ne sont pas vérifiés par NGS. Avec un faible taux d’erreur dans la synthèse de gène, nous estimons que vous devrez séquencer environ 3, 4 ou 6 colonies pour des fragments de gènes de 600, 1 200 ou 1 800 bps respectivement pour obtenir un clone à séquence parfaite sûr à 99 %.


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Quelle est la durée de conservation des fragments de gènes et des gènes clonaux ?

Twist Bioscience expédie ses produits ADN desséchés ou remis en suspension dans des tubes de microcentrifugation de 2 mL ou en plaques de 96 ou de 384 puits. L’ADN desséché est expédié à température ambiante et l’ADN remis en suspension est expédié congelé.

L’ADN à double brin et les oligonucléotides à simple brin sont stables dans la plupart des conditions de stockage standard en laboratoire. Il convient cependant de tenir compte des bonnes pratiques suivantes pour préserver la haute qualité de l’ADN synthétisé par Twist Bioscience.

  • Twist recommande de stocker l’ADN desséché pendant les durées suivantes en fonction des conditions de stockage.
    • Température ambiante pendant 3 mois.
    • 4 °C pendant 12 mois.
    • -20 °C pendant 24 mois.
    • -80 °C pour un stockage à long terme.
  • Directives pour la remise en suspension
    • Pour la remise en suspension, centrifugez brièvement le tube ou la plaque avant l’ouverture et remettez en suspension dans un tampon Tris-EDTA (TE) non nucléasique à pH 8,0 ou dans 10 mM de Tris-HCl, pH 8,0, jusqu’à la concentration désirée.
    • Une concentration d’au moins 10 ng/μL est recommandée pour la dilution de la pâte, mais la concentration optimale devra être déterminée en fonction de l’application que vous désirez.
    • Préparez les aliquotes de dilution de pâte et séparez les aliquotes de travail pour limiter les risques de contamination et réduire le nombre de cycles de congélation/décongélation. Utilisez les aliquotes de travail dès que possible après la préparation et limitez le plus possible l’exposition à des températures élevées.
  • ADN remis en suspension
    • Certains produits peuvent être remis en suspension. Votre ADN peut arriver dans l’un des tampons suivants. Nous conseillons de centrifuger brièvement le tube ou la plaque avant ouverture.
      • Tampon d’élution (2 mM Tris-Cl, pH 8,5)
      • Tampon TE (10 mM Tris-Cl, pH 8,0, 1 mM EDTA)
      • Tampon TE EDTA faible (10 mM Tris-Cl, pH 8,0, 0,1 mM EDTA)
      • Eau       
        • Nous déconseillons le stockage prolongé dans l’eau.
    • Twist conseille de stocker l’ADN remis en suspension pendant les durées suivantes en fonction des conditions de stockage.
      • Température ambiante pendant 3 mois.
      • 4 °C pendant 12 mois.
      • -20 °C pendant 24 mois.
      • -80 °C pour un stockage à long terme.

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En quoi consiste l’option de rendement cible ?

Lors de la commande d’un gène cloné, les utilisateurs peuvent, au moment du paiement, sélectionner une masse entière d’ADN à livrer dans le cadre de leur préparation de plasmide. La masse est automatiquement mesurée et garantie pour l’utilisateur. Si nous n’atteignons pas la masse requise en une seule préparation, nous effectuons des préparations supplémentaires jusqu’à obtenir la masse demandée.

 


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Quelle taille de gène maximale puis-je acheter ?

Actuellement, la taille maximale d’un fragment de gène (ADN linéaire à double brin) est de 5 kb. La taille maximale d’un gène clonal (un gène cloné dans un vecteur) est de 5 kb.


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Comment dois-je remettre mes gènes en suspension ?

Les produits ADN de Twist sont desséchés et expédiés en plaques de 96/384 puits ou en tubes de microcentrifugation de 2 mL. Bien que les produits ADN à double brin soient stables dans la plupart des conditions de stockage standard, nous conseillons ce qui suit pour préserver la haute qualité de l’ADN :

  • Après réception, centrifugez brièvement le tube ou la plaque et remettez l’ADN en suspension dans un tampon Tris-EDTA (TE) non nucléasique à pH 8,0 ou dans 10 mM de Tris-HCl, pH 8,0, jusqu’à la concentration désirée.
  • Nous déconseillons la remise en suspension dans de l’eau.
  • Une concentration d’au moins 10 ng/ul est recommandée pour une solution de pâte, mais la concentration optimale devra être déterminée en fonction de l’application que vous désirez.
  • Préparez les aliquotes de pâte et séparez les aliquotes de travail pour limiter les risques de contamination et réduire le nombre de cycles de congélation/décongélation.
  • Pour un stockage à long terme, congelez l’ADN à -20 °C pendant une année au maximum ou à -80 °C pour une conservation encore plus longue.

Des directives sur la remise en suspension sont disponibles ici


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Comment les gènes sont-ils livrés ?

Les produits de gènes sont généralement livrés en tant que produit desséché (sauf mention contraire).

Les gènes clonaux sont livrés clonés dans l’un des vecteurs du catalogue de Twist ou dans votre propre vecteur personnalisé. Les fragments de gènes sont livrés sous forme de séquences linéaires à double brin (avec ou sans adaptateurs flanquants).

Nous fournissons les séquences de gènes sur des plaques de 96/384 puits. Pour les petites commandes (moins de 10), les gènes peuvent être livrés en tubes sans coût supplémentaire. Pour les commandes de dix gènes ou plus, les demandes de commande en tube s’accompagnent de frais supplémentaires de 50 $ par commande.


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Twist répond-il aux exigences de contrôle de biosécurité des États-Unis ?

Twist atteste que l’entreprise adhère à toutes les exigences du cadre pour le criblage de la synthèse des acides nucléiques (Framework for Nucleic Acid Synthesis Screening) de l’Office of Science and Technology (OSTP) des États-Unis. Vous pouvez télécharger l’attestation ici.


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J’ai reçu mes gènes, mais le rendement indique « S.O. ». Qu’est-ce que cela veut dire ?

Les gènes clonaux ont un rendement minimal garanti de 50 ng. Bien que ce soit rare, il peut arriver qu’après vérification de la séquence par NGS nous soyons dans l’incapacité de respecter de rendement minimal. Nous expédierons néanmoins tout le matériel que nous aurons pu récupérer.

Pour ces constructions, le rendement sera indiqué comme étant « S.O. ». Vous pouvez tenter de récupérer la construction par transformation en bactérie (veuillez contacter le service client pour obtenir plus d’informations). Les constructions qui ne respectent pas un rendement minimal ne vous seront pas facturées.


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Quel est le délai de traitement pour la synthèse de gène ?

Pour les fragments de gènes avec adaptateurs, le délai d’exécution moyen est de 2 à 4 jours ouvrables. Ce délai est de 4 à 8 jours ouvrables pour les fragments de gènes sans adaptateurs.

Pour les gènes clonaux, le délai d’exécution est de 4 à 7 jours ouvrables pour le service « Express » et de 10 jours ouvrables pour le service « Standard ».

Le délai de traitement des gènes clonaux est basé sur le temps nécessaire pour terminer la synthèse et le clonage avec succès. Si un gène échoue à n’importe quel stade, il est envoyé dans notre pipeline de récupération et peut être retardé. Les services en option (comme les demandes de rendement plus élevé) peuvent allonger le délai de traitement.


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Qu’est-ce qui distingue une préparation d’origine non animale ?

Afin de garantir que le processus de fabrication soit exempt de maladies bovines transmissibles, Twist propose des constructions d’ADN purifié produites à partir de matériaux d’origine non animale tout au long des processus de clonage, de transformation, d’extension et de purification.


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Où puis-je trouver une FDS pour mes produits de gènes ?

Sur notre page Internet, nous ne disposons de fiches de données de sécurité que pour nos produits NGS. Pour obtenir des fiches de données de sécurité pour nos produits de biologie de synthèse, veuillez nous envoyer un e-mail à l’adresse [email protected].


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Comment puis-je connaître l’ordonnancement de mes gènes dans votre plaque à 96 puits ?

Lorsque vous êtes connecté(e) à votre compte, vous pouvez télécharger des informations sur la carte de la plaque pour toute commande. 

Sur la page principale, cliquez sur Commandes et ébauches. Cliquez ensuite sur Anciennes commandes. Toutes vos commandes à Twist s’affichent. Cliquez sur la commande qui vous intéresse. Sur l’onglet Livrées, vous verrez un lien permettant de télécharger votre carte des plaques.

 

 


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Quelle taille de gène minimale puis-je acheter ?

Actuellement, la taille minimale de notre produit de synthèse de gène (fragment de gène ou gène clonal) est de 300 bp.


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Quelle est la différence entre les Clonal Genes et les Gene Fragments de Twist ?

Les fragments de gène sont assemblés, puis leur taille et leur pureté sont vérifiées par analyse de fragments. Leur séquence n’est pas vérifiée. Les fragments de gènes ne sont donc pas clonaux (c’est-à-dire qu’il y a un mélange de matériel parfait et non parfait). Si vous prévoyez de cloner des fragments, il importe de cribler plusieurs clones. La plage de longueurs des fragments va de 300 à 5 000 bp.

Inversement, les gènes clonaux sont assemblés, puis clonés dans un vecteur personnalisé ou dans l’un des vecteurs du catalogue personnel de Twist. La séquence des clones est ensuite vérifiée par NGS afin de confirmer que seules les séquences requises sont expédiées et livrées. La plage de longueurs des gènes clonaux va de 300 à 5 000 bp. 


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Quelle quantité de mon ADN est-elle livrée ?

Pour les fragments de gènes, nous garantissons un rendement de 100 à 1 000 ng par fragment.

Nous proposons plusieurs options de rendement pour les gènes clonaux :

  • Microprep : 1 µg - 4 µg per clone
  • Miniprep : 4 µg - 10 µg per clone
  • Midiprep : 10 µg à 100 µg par clone
  • Maxiprep : 100 µg à 1 mg par clone

Selon votre séquence (et le vecteur pour les gènes clonaux), le rendement peut être plus bas. Si le rendement est anormalement bas, cela peut entraîner l’échec de votre gène. Please note that sequences that fail for this reason will still ship, but you will not be charged. Customized target yield for miniprep scale is also available.


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En quoi le traitement diffère-t-il lorsque mon gène est fourni sur une plaque au lieu d’être livré dans un tube ?

Il n’y a pas de différence dans la fabrication de votre gène, ni d’avantage ou inconvénient en termes de qualité : ce n’est qu’une question de préférence. Certains clients préfèrent les tubes aux plaques parce qu’ils se conforment mieux à leurs exigences de stockage. D’autres clients préfèrent les plaques parce qu’elles permettent un processus à haut débit. Les commandes comportant 10 gènes ou plus se verront appliquer un montant forfaiture supplémentaire de 50 $ si des tubes sont demandés.  


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Dois-je inclure des sites de restriction ou des protubérances sur mes séquences ?

En ce qui concerne les fragments de gènes (avec ou sans adaptateurs), vous voudrez peut-être ajouter vos propres sites de restriction aux extrémités de chaque segment afin de pouvoir facilement cloner le fragment dans le vecteur de votre choix.

Pour les gènes clonaux, envoyez simplement les séquences d’inserts uniques que vous voulez que nous clonions dans le squelette de vecteur. Nous utilisons une méthode de clonage exclusive basée sur l’homologie pour assembler nos gènes clonaux et nous concevons et ajoutons les séquences saillantes d’homologues pour vous. Vous n’avez pas besoin de tenir compte de notre stratégie de clonage lorsque vous concevez votre insert. 

Veuillez noter que nos vecteurs de clonage ne comportent pas de sites de restriction flanquant directement l’insert. Cela permet une totale flexibilité dans la conception. Vous pouvez donc ajouter les sites de restriction souhaités sur les flancs de votre insert à utiliser dans votre processus en aval.

Nos points d’insertion de vecteur d’expression sont signalés par deux sites de restriction qui seront intégralement préservés et flanqueront votre insert dans la construction finale. Nous conseillons aux clients de vérifier les séquences de la construction finale en cliquant sur le bouton « Télécharger des séquences » dans l’outil de conception. Une fois la commande envoyée à la fabrication, elle ne peut plus être modifiée.

 

 


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Comment Twist teste-t-elle la qualité de la synthèse de gène ?

Tous nos produits de synthèse de gènes clonaux sont vérifiés par séquence de NGS.

Les fragments de gènes ne sont pas vérifiés par NGS. Avec un faible taux d’erreur dans la synthèse de gène, nous estimons que vous devrez séquencer environ 3, 4 ou 6 colonies pour des fragments de gènes de 600, 1 200 ou 1 800 bps respectivement pour obtenir un clone à séquence parfaite sûr à 99 %.


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Quelle est la durée de conservation des fragments de gènes et des gènes clonaux ?

Twist Bioscience expédie ses produits ADN desséchés ou remis en suspension dans des tubes de microcentrifugation de 2 mL ou en plaques de 96 ou de 384 puits. L’ADN desséché est expédié à température ambiante et l’ADN remis en suspension est expédié congelé.

L’ADN à double brin et les oligonucléotides à simple brin sont stables dans la plupart des conditions de stockage standard en laboratoire. Il convient cependant de tenir compte des bonnes pratiques suivantes pour préserver la haute qualité de l’ADN synthétisé par Twist Bioscience.

  • Twist recommande de stocker l’ADN desséché pendant les durées suivantes en fonction des conditions de stockage.
    • Température ambiante pendant 3 mois.
    • 4 °C pendant 12 mois.
    • -20 °C pendant 24 mois.
    • -80 °C pour un stockage à long terme.
  • Directives pour la remise en suspension
    • Pour la remise en suspension, centrifugez brièvement le tube ou la plaque avant l’ouverture et remettez en suspension dans un tampon Tris-EDTA (TE) non nucléasique à pH 8,0 ou dans 10 mM de Tris-HCl, pH 8,0, jusqu’à la concentration désirée.
    • Une concentration d’au moins 10 ng/μL est recommandée pour la dilution de la pâte, mais la concentration optimale devra être déterminée en fonction de l’application que vous désirez.
    • Préparez les aliquotes de dilution de pâte et séparez les aliquotes de travail pour limiter les risques de contamination et réduire le nombre de cycles de congélation/décongélation. Utilisez les aliquotes de travail dès que possible après la préparation et limitez le plus possible l’exposition à des températures élevées.
  • ADN remis en suspension
    • Certains produits peuvent être remis en suspension. Votre ADN peut arriver dans l’un des tampons suivants. Nous conseillons de centrifuger brièvement le tube ou la plaque avant ouverture.
      • Tampon d’élution (2 mM Tris-Cl, pH 8,5)
      • Tampon TE (10 mM Tris-Cl, pH 8,0, 1 mM EDTA)
      • Tampon TE EDTA faible (10 mM Tris-Cl, pH 8,0, 0,1 mM EDTA)
      • Eau       
        • Nous déconseillons le stockage prolongé dans l’eau.
    • Twist conseille de stocker l’ADN remis en suspension pendant les durées suivantes en fonction des conditions de stockage.
      • Température ambiante pendant 3 mois.
      • 4 °C pendant 12 mois.
      • -20 °C pendant 24 mois.
      • -80 °C pour un stockage à long terme.

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En quoi consiste l’option de rendement cible ?

Lors de la commande d’un gène cloné, les utilisateurs peuvent, au moment du paiement, sélectionner une masse entière d’ADN à livrer dans le cadre de leur préparation de plasmide. La masse est automatiquement mesurée et garantie pour l’utilisateur. Si nous n’atteignons pas la masse requise en une seule préparation, nous effectuons des préparations supplémentaires jusqu’à obtenir la masse demandée.

 


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Quelle taille de gène maximale puis-je acheter ?

Actuellement, la taille maximale d’un fragment de gène (ADN linéaire à double brin) est de 5 kb. La taille maximale d’un gène clonal (un gène cloné dans un vecteur) est de 5 kb.


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Comment dois-je remettre mes gènes en suspension ?

Les produits ADN de Twist sont desséchés et expédiés en plaques de 96/384 puits ou en tubes de microcentrifugation de 2 mL. Bien que les produits ADN à double brin soient stables dans la plupart des conditions de stockage standard, nous conseillons ce qui suit pour préserver la haute qualité de l’ADN :

  • Après réception, centrifugez brièvement le tube ou la plaque et remettez l’ADN en suspension dans un tampon Tris-EDTA (TE) non nucléasique à pH 8,0 ou dans 10 mM de Tris-HCl, pH 8,0, jusqu’à la concentration désirée.
  • Nous déconseillons la remise en suspension dans de l’eau.
  • Une concentration d’au moins 10 ng/ul est recommandée pour une solution de pâte, mais la concentration optimale devra être déterminée en fonction de l’application que vous désirez.
  • Préparez les aliquotes de pâte et séparez les aliquotes de travail pour limiter les risques de contamination et réduire le nombre de cycles de congélation/décongélation.
  • Pour un stockage à long terme, congelez l’ADN à -20 °C pendant une année au maximum ou à -80 °C pour une conservation encore plus longue.

Des directives sur la remise en suspension sont disponibles ici


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Comment les gènes sont-ils livrés ?

Les produits de gènes sont généralement livrés en tant que produit desséché (sauf mention contraire).

Les gènes clonaux sont livrés clonés dans l’un des vecteurs du catalogue de Twist ou dans votre propre vecteur personnalisé. Les fragments de gènes sont livrés sous forme de séquences linéaires à double brin (avec ou sans adaptateurs flanquants).

Nous fournissons les séquences de gènes sur des plaques de 96/384 puits. Pour les petites commandes (moins de 10), les gènes peuvent être livrés en tubes sans coût supplémentaire. Pour les commandes de dix gènes ou plus, les demandes de commande en tube s’accompagnent de frais supplémentaires de 50 $ par commande.


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Twist atteste que l’entreprise adhère à toutes les exigences du cadre pour le criblage de la synthèse des acides nucléiques (Framework for Nucleic Acid Synthesis Screening) de l’Office of Science and Technology (OSTP) des États-Unis. Vous pouvez télécharger l’attestation ici.


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J’ai reçu mes gènes, mais le rendement indique « S.O. ». Qu’est-ce que cela veut dire ?

Les gènes clonaux ont un rendement minimal garanti de 50 ng. Bien que ce soit rare, il peut arriver qu’après vérification de la séquence par NGS nous soyons dans l’incapacité de respecter de rendement minimal. Nous expédierons néanmoins tout le matériel que nous aurons pu récupérer.

Pour ces constructions, le rendement sera indiqué comme étant « S.O. ». Vous pouvez tenter de récupérer la construction par transformation en bactérie (veuillez contacter le service client pour obtenir plus d’informations). Les constructions qui ne respectent pas un rendement minimal ne vous seront pas facturées.


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Quel est le délai de traitement pour la synthèse de gène ?

Pour les fragments de gènes avec adaptateurs, le délai d’exécution moyen est de 2 à 4 jours ouvrables. Ce délai est de 4 à 8 jours ouvrables pour les fragments de gènes sans adaptateurs.

Pour les gènes clonaux, le délai d’exécution est de 4 à 7 jours ouvrables pour le service « Express » et de 10 jours ouvrables pour le service « Standard ».

Le délai de traitement des gènes clonaux est basé sur le temps nécessaire pour terminer la synthèse et le clonage avec succès. Si un gène échoue à n’importe quel stade, il est envoyé dans notre pipeline de récupération et peut être retardé. Les services en option (comme les demandes de rendement plus élevé) peuvent allonger le délai de traitement.


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Afin de garantir que le processus de fabrication soit exempt de maladies bovines transmissibles, Twist propose des constructions d’ADN purifié produites à partir de matériaux d’origine non animale tout au long des processus de clonage, de transformation, d’extension et de purification.


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Actuellement, la taille minimale de notre produit de synthèse de gène (fragment de gène ou gène clonal) est de 300 bp.


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Les fragments de gène sont assemblés, puis leur taille et leur pureté sont vérifiées par analyse de fragments. Leur séquence n’est pas vérifiée. Les fragments de gènes ne sont donc pas clonaux (c’est-à-dire qu’il y a un mélange de matériel parfait et non parfait). Si vous prévoyez de cloner des fragments, il importe de cribler plusieurs clones. La plage de longueurs des fragments va de 300 à 5 000 bp.

Inversement, les gènes clonaux sont assemblés, puis clonés dans un vecteur personnalisé ou dans l’un des vecteurs du catalogue personnel de Twist. La séquence des clones est ensuite vérifiée par NGS afin de confirmer que seules les séquences requises sont expédiées et livrées. La plage de longueurs des gènes clonaux va de 300 à 5 000 bp. 


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Pour les fragments de gènes, nous garantissons un rendement de 100 à 1 000 ng par fragment.

Nous proposons plusieurs options de rendement pour les gènes clonaux :

  • Microprep : 1 µg - 4 µg per clone
  • Miniprep : 4 µg - 10 µg per clone
  • Midiprep : 10 µg à 100 µg par clone
  • Maxiprep : 100 µg à 1 mg par clone

Selon votre séquence (et le vecteur pour les gènes clonaux), le rendement peut être plus bas. Si le rendement est anormalement bas, cela peut entraîner l’échec de votre gène. Please note that sequences that fail for this reason will still ship, but you will not be charged. Customized target yield for miniprep scale is also available.


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