Préparation de votre commande

1. La longueur du fragment peut être comprise entre 301 et 500 nt (incluant les régions flanquantes constantes).
2. La longueur totale du fragment ne peut excéder 500 nucléotides, y compris les régions flanquantes constantes qui seront utilisées pour l’amplification par PCR. Les régions flanquantes doivent avoir une longueur d’au moins 20 à 25 bp, ce qui permet d’avoir jusqu’à 460 bp de région codante variable. 
3. La variation de la longueur des fragments, du plus court au plus long, ne doit pas dépasser 80 bp (par exemple, si le fragment le plus long est de 400 bp, le fragment le plus court doit être > 320 bp).

Oui, nous pouvons ajouter des régions flanquantes Twist standard à vos fragments qui peuvent être utilisés pour le clonage par restriction.

Non ; nous pouvons uniquement synthétiser des séquences contenant les quatre bases standard A, C, G et T.  L’utilisation de bases dégénérées (R, Y, S, W, K, M, B, D, H, V, N) n’est pas autorisée. Cependant, pour disposer des quatre bases (ou d’un sous-ensemble des bases) à une position donnée dans un fragment, il est possible de concevoir des fragments distincts ayant chacun une base différente au niveau du site d’intérêt.

Aucune exigence en matière de complexité pour les FGM. Toutefois, certaines caractéristiques risquent de conduire à des résultats insuffisants :

1. Les caractéristiques telles que les répétitions directes et les séquences conservées partagées par tous les variants peuvent entraîner une certaine recombinaison au cours de l’amplification.
2. Les homopolymères longs (> 20 pb) peuvent provoquer une certaine absence d’amplification au cours de l’amplification.
3. Des structures en épingles à cheveux risquent de conduire à une mauvaise amplification, et donc à une sous-représentation ou à une absence d’amplification de ces variants.

Le prix dépend de la complexité (taille du pool) et de la longueur des fragments (301 à 350 nt, 351 à 400 nt, 401 à 450 nt et 451 à 500 nt).

Pour les fragments de gènes multiplex, le délai de traitement est de 8 à 12 jours ouvrables.

Tenir compte des règles standard pour la conception des amorces :

1. Longueur de 20 à 25 bp
2. Teneur en G/C de 35 à 70 %
3. Température de fusion (Tf) de 55-60 °C
4. Les paires d’amorces doivent avoir une Tf à moins de 5 °C l’une de l’autre
5. Les paires d’amorces ne doivent pas comporter de régions complémentaires
6. Éviter les sites de liaison d’amorces internes dans la région variable

1. L’électrophorèse capillaire est effectuée sur le pool final pour déterminer la pureté de l’échantillon. Au moins 90 % des molécules du pool doivent avoir la longueur attendue.
2. La quantification par fluorescence est effectuée sur l’échantillon final pour s’assurer qu’il contient au moins 200 ng de matériel.
3. Twist n’effectue aucun séquençage sur le pool et ne garantit pas la qualité en termes de représentation ou de taux d’erreur. Nous avons toutefois constaté, au cours du développement, que la plupart des pools ont un rapport du 90e centile au 10e centile inférieur à 3 et un taux d’erreur moyen d’environ 1:2 000.

Non, tous les fragments du pool doivent avoir les mêmes régions flanquantes. Il est possible de commander plusieurs ensembles de régions flanquantes en commandant plusieurs pools. Il est également possible de concevoir un pool unique avec des régions flanquantes internes différentes et des régions flanquantes externes universelles que Twist utilisera pour l’amplification. Il est ensuite possible d’amplifier les sous-pools, bien que cela comporte le risque inhérent de biaiser l’uniformité et/ou d’épuiser le matériel de référence.

Étape 1 : Télécharger le formulaire de demande de FGM et remplir tous les champs du formulaire pour la conception de vos FGM.  

Étape 2 : Charger le formulaire de demande complété ici.  

En cas de question ou de problème, veuillez nous contacter par e-mail (customersupport@twistbioscience.com) ou par messagerie instantanée.

1. La longueur du fragment peut être comprise entre 301 et 500 nt (incluant les régions flanquantes constantes).
2. La longueur totale du fragment ne peut excéder 500 nucléotides, y compris les régions flanquantes constantes qui seront utilisées pour l’amplification par PCR. Les régions flanquantes doivent avoir une longueur d’au moins 20 à 25 bp, ce qui permet d’avoir jusqu’à 460 bp de région codante variable. 
3. La variation de la longueur des fragments, du plus court au plus long, ne doit pas dépasser 80 bp (par exemple, si le fragment le plus long est de 400 bp, le fragment le plus court doit être > 320 bp).

Oui, nous pouvons ajouter des régions flanquantes Twist standard à vos fragments qui peuvent être utilisés pour le clonage par restriction.

Non ; nous pouvons uniquement synthétiser des séquences contenant les quatre bases standard A, C, G et T.  L’utilisation de bases dégénérées (R, Y, S, W, K, M, B, D, H, V, N) n’est pas autorisée. Cependant, pour disposer des quatre bases (ou d’un sous-ensemble des bases) à une position donnée dans un fragment, il est possible de concevoir des fragments distincts ayant chacun une base différente au niveau du site d’intérêt.

Aucune exigence en matière de complexité pour les FGM. Toutefois, certaines caractéristiques risquent de conduire à des résultats insuffisants :

1. Les caractéristiques telles que les répétitions directes et les séquences conservées partagées par tous les variants peuvent entraîner une certaine recombinaison au cours de l’amplification.
2. Les homopolymères longs (> 20 pb) peuvent provoquer une certaine absence d’amplification au cours de l’amplification.
3. Des structures en épingles à cheveux risquent de conduire à une mauvaise amplification, et donc à une sous-représentation ou à une absence d’amplification de ces variants.

Le prix dépend de la complexité (taille du pool) et de la longueur des fragments (301 à 350 nt, 351 à 400 nt, 401 à 450 nt et 451 à 500 nt).

Pour les fragments de gènes multiplex, le délai de traitement est de 8 à 12 jours ouvrables.

Tenir compte des règles standard pour la conception des amorces :

1. Longueur de 20 à 25 bp
2. Teneur en G/C de 35 à 70 %
3. Température de fusion (Tf) de 55-60 °C
4. Les paires d’amorces doivent avoir une Tf à moins de 5 °C l’une de l’autre
5. Les paires d’amorces ne doivent pas comporter de régions complémentaires
6. Éviter les sites de liaison d’amorces internes dans la région variable

1. L’électrophorèse capillaire est effectuée sur le pool final pour déterminer la pureté de l’échantillon. Au moins 90 % des molécules du pool doivent avoir la longueur attendue.
2. La quantification par fluorescence est effectuée sur l’échantillon final pour s’assurer qu’il contient au moins 200 ng de matériel.
3. Twist n’effectue aucun séquençage sur le pool et ne garantit pas la qualité en termes de représentation ou de taux d’erreur. Nous avons toutefois constaté, au cours du développement, que la plupart des pools ont un rapport du 90e centile au 10e centile inférieur à 3 et un taux d’erreur moyen d’environ 1:2 000.

Non, tous les fragments du pool doivent avoir les mêmes régions flanquantes. Il est possible de commander plusieurs ensembles de régions flanquantes en commandant plusieurs pools. Il est également possible de concevoir un pool unique avec des régions flanquantes internes différentes et des régions flanquantes externes universelles que Twist utilisera pour l’amplification. Il est ensuite possible d’amplifier les sous-pools, bien que cela comporte le risque inhérent de biaiser l’uniformité et/ou d’épuiser le matériel de référence.

Étape 1 : Télécharger le formulaire de demande de FGM et remplir tous les champs du formulaire pour la conception de vos FGM.  

Étape 2 : Charger le formulaire de demande complété ici.  

En cas de question ou de problème, veuillez nous contacter par e-mail (customersupport@twistbioscience.com) ou par messagerie instantanée.