Nous n’utilisons pas de clonage à base d’enzyme de restriction. Merci de n’inclure aucun nucléotide supplémentaire dans vos inserts en prévision de la digestion aux enzymes de restriction suivie par la ligation d’ADN.

Lorsque vous commandez un gène clonal, nous synthétisons exactement la séquence d’insert que vous nous envoyez. Si vous incluez des sites latéraux d’enzymes de restriction, nous les synthétiserons aussi ; les paires de bases supplémentaires ne sont pas excisées. Les séquences d’inserts ne sont absolument pas traitées une fois qu’elles ont été reçues.  

Si vous commandez un gène clonal à l’aide d’un vecteur Twist ou d’un vecteur personnalisé, nous vous conseillons fortement de revérifier la séquence de la construction finale à l’aide du bouton Télécharger des séquences dans l’outil de conception :

Veuillez noter qu’une fois qu’un gène a été commandé, nous ne pouvons pas modifier la séquence de quelque façon que ce soit. Si vous découvrez une erreur dans votre construction, veuillez contacter [email protected] pour obtenir une assistance.

Veuillez nous fournir 10 ug d’ADN vecteur à une concentration de 100 ng/ul dans au moins 100 ul. Une quantité insuffisante d’ADN vecteur entraînera un retard dans le processus d’intégration.

Non, vous devez inclure la séquence complète du vecteur envoyé à Twist. Nous utilisons ces informations pour le CQ de la séquence et pour confirmer la méthode de clonage. Nous séquencerons votre vecteur et le comparerons à la séquence que vous nous avez envoyée. Les erreurs ou disparités entre les résultats des deux séquences peuvent retarder l’intégration du vecteur.

Vous devrez télécharger la séquence complète du vecteur au format GenBank avec la séquence complète du plasmide qui sera expédié à Twist. Twist séquencera le vecteur entrant pour s’assurer que les séquences correspondent. Toute disparité retardera le processus d’intégration.

Assurez-vous que vos vecteurs respectent les exigences suivantes :

• Volume de vecteur ≥ 100 uL (le matériel plasmidique ne peut pas être envoyé sur papier filtre)
• Concentration du vecteur ≥ 100 ng/uL
• Masse du vecteur 10 ug
• Doivent avoir une origine de réplication bactérienne (en non par faible copie)
• Doivent être une population clonale
• Doivent être circulaires
• Doivent avoir un marqueur de résistance aux antibiotiques
• Ne doivent pas contenir d’homopolymères/séquence répétitive > 9 bp dans un rayon de 40 bp du site d’insertion
• Répétitions : doivent contenir au moins 40 bp de séquence unique sans séquences répétées directes ou séquences répétées inverses > 19 bp en amont et en aval du site d’insertion
• Ne doivent pas contenir de ccdB dans le produit de gène final
• Doivent être en mesure de linéariser par site de restriction enzymatique dans un rayon de 50 bp du site d’insertion
• Doivent être conformes au niveau de sécurité BSL-1

Résistance aux antibiotiques :

Le plasmide doit contenir l’un des marqueurs de résistance aux antibiotiques ci-dessous pour l’E.coli. Les concentrations standard sont les suivantes :

Lignées cellulaires (E. coli)       

• Lignée cellulaire disponible en production        
• Souche de clonage semblable à DH10Beta   
• Souche semblable à Stbl3 (peut être cultivée à 37 ℃)        

Nombre de copies              

Seules les origines constitutives de la réplication sont autorisées.

Conditions de culture     

• Température standard : 37 ℃/30 ℃   
• Durée standard : du jour au lendemain/24 heures         
• Les colonies sur plaque doivent atteindre une taille permettant l’automatisation après 16 heures/24 heures de culture sur LB-Lennox.