ご注文の準備

1. 断片長は 301 ～ 500 塩基（定常フランキング配列を含む）です。
2. 断片の全長は、 PCR を用いた増幅に使用される定常フランキング配列を含めて 500 ヌクレオチドを超えることはできません。フランキング配列の長さは少なくとも20 ～ 25 bp である必要があり、そのため可変コード領域は最大 460 bp まで許容されます。
3. 最短の配列と最長の配列の長さの差異が 80 bp を超えないようにします（例えば、最長の配列が 400 bp であれば、最短の配列は 320 bp 超である必要があります）。

はい。制限酵素を用いたクローニングに使うことができる、 Twist の標準フランキング配列を断片に追加できます。

いいえ。Twist では、A、C、G、T の 4 つの標準塩基を含む配列しか合成できません。混合塩基（R、Y、S、W、K、M、B、D、H、V、N）を使用することはできません。ただし、遺伝子断片の特定の位置に 4 種類すべての塩基（すなわち塩基のサブセット）を配置したい場合は、目的の部位にそれぞれ異なる塩基を配置した別々の断片を設計することができます。

MGF には、複雑さに関する要件はありません。ただし、機能要素によっては以下のように最適な結果が得られない場合があります。

1. すべてのバリアント間でダイレクトリピートや保存配列などが共有されているという特徴があると、増幅中に何らかの組換えが生じる場合があります。
2. 長いホモポリマー（> 20 bp）は、増幅中のドロップアウトの発生につながる場合があります。
3. ヘアピンが強いと増幅が不十分になり、その結果、それらのバリアントの過少表現やドロップアウトにつながる場合があります。

価格は配列の多様性（プールサイズ）や断片長（301 ～ 350 塩基、351 ～ 400 塩基、401 ～ 450 塩基、451 ～ 500 塩基）ごとに異なります。

Multiplexed Gene Fragments の納期は 8 ～ 12 営業日です。

プライマー設計では以下の標準ルールを考慮してください。

1. 長さ20 ～ 25bp
2. 35 ～ 70% のG/C含有量
3. 融解温度（Tm）55 ～ 60 °C
4. プライマーペアは互いの Tm が 5 °C 以内であること
5. プライマーペアは相補的領域を持たないこと
6. 可変領域の内部にプライマー結合部位を設けないこと

1. 最終プールに対してキャピラリー電気泳動を実施して、サンプルの純度を測定します。プール内の分子の少なくとも 90% が、期待する鎖長の範囲内に収まることを確認します。
2. 最終サンプルに対して蛍光ベースの定量分析を行い、少なくとも 200 ng の物質が含まれることを保証します。
3. Twist はプールについてシーケンシングは実施せず、表現やエラー率などの品質を保証しません。ただし、開発中に大半のプールで 90/10パーセンタイル比が 3 未満、平均エラー率が約 1 : 2,000 であることを確認しています。

いいえ、プール内のすべての断片が同じフランキング領域の配列を持つ必要があります。複数のプールを注文することで、それぞれフランキング領域が異なる複数セットを持つことができます。あるいは、 Twist が増幅に用いる汎用的な外側のフランキング領域と、それぞれの内側に異なるフランキング領域を持つ単一のプールを設計することもできます。その後、そうしたサブプールを増幅することもできますが、均一性に歪みが生じたり、鋳型鎖が不足したりするという特有のリスクが伴います。

ステップ 1：MGF Submission Form をダウンロードし、MGF の設計について、フォームのすべての欄にご記入ください。

ステップ 2：記入済みのフォームをこちらからアップロードします。

何かご不明な点や問題点がございましたら、メール（customersupport@twistbioscience.com）やチャットでお問い合わせください。

1. 断片長は 301 ～ 500 塩基（定常フランキング配列を含む）です。
2. 断片の全長は、 PCR を用いた増幅に使用される定常フランキング配列を含めて 500 ヌクレオチドを超えることはできません。フランキング配列の長さは少なくとも20 ～ 25 bp である必要があり、そのため可変コード領域は最大 460 bp まで許容されます。
3. 最短の配列と最長の配列の長さの差異が 80 bp を超えないようにします（例えば、最長の配列が 400 bp であれば、最短の配列は 320 bp 超である必要があります）。

はい。制限酵素を用いたクローニングに使うことができる、 Twist の標準フランキング配列を断片に追加できます。

いいえ。Twist では、A、C、G、T の 4 つの標準塩基を含む配列しか合成できません。混合塩基（R、Y、S、W、K、M、B、D、H、V、N）を使用することはできません。ただし、遺伝子断片の特定の位置に 4 種類すべての塩基（すなわち塩基のサブセット）を配置したい場合は、目的の部位にそれぞれ異なる塩基を配置した別々の断片を設計することができます。

MGF には、複雑さに関する要件はありません。ただし、機能要素によっては以下のように最適な結果が得られない場合があります。

1. すべてのバリアント間でダイレクトリピートや保存配列などが共有されているという特徴があると、増幅中に何らかの組換えが生じる場合があります。
2. 長いホモポリマー（> 20 bp）は、増幅中のドロップアウトの発生につながる場合があります。
3. ヘアピンが強いと増幅が不十分になり、その結果、それらのバリアントの過少表現やドロップアウトにつながる場合があります。

価格は配列の多様性（プールサイズ）や断片長（301 ～ 350 塩基、351 ～ 400 塩基、401 ～ 450 塩基、451 ～ 500 塩基）ごとに異なります。

Multiplexed Gene Fragments の納期は 8 ～ 12 営業日です。

プライマー設計では以下の標準ルールを考慮してください。

1. 長さ20 ～ 25bp
2. 35 ～ 70% のG/C含有量
3. 融解温度（Tm）55 ～ 60 °C
4. プライマーペアは互いの Tm が 5 °C 以内であること
5. プライマーペアは相補的領域を持たないこと
6. 可変領域の内部にプライマー結合部位を設けないこと

1. 最終プールに対してキャピラリー電気泳動を実施して、サンプルの純度を測定します。プール内の分子の少なくとも 90% が、期待する鎖長の範囲内に収まることを確認します。
2. 最終サンプルに対して蛍光ベースの定量分析を行い、少なくとも 200 ng の物質が含まれることを保証します。
3. Twist はプールについてシーケンシングは実施せず、表現やエラー率などの品質を保証しません。ただし、開発中に大半のプールで 90/10パーセンタイル比が 3 未満、平均エラー率が約 1 : 2,000 であることを確認しています。

いいえ、プール内のすべての断片が同じフランキング領域の配列を持つ必要があります。複数のプールを注文することで、それぞれフランキング領域が異なる複数セットを持つことができます。あるいは、 Twist が増幅に用いる汎用的な外側のフランキング領域と、それぞれの内側に異なるフランキング領域を持つ単一のプールを設計することもできます。その後、そうしたサブプールを増幅することもできますが、均一性に歪みが生じたり、鋳型鎖が不足したりするという特有のリスクが伴います。

ステップ 1：MGF Submission Form をダウンロードし、MGF の設計について、フォームのすべての欄にご記入ください。

ステップ 2：記入済みのフォームをこちらからアップロードします。

何かご不明な点や問題点がございましたら、メール（customersupport@twistbioscience.com）やチャットでお問い合わせください。