Twist は、抗体作製用に合成された Clonal Genes（プラスミド DNA）のグリセロールストックを提供しています。抗体作製において、DNA はトランスフェクションのためにすべて使用されますが、グリセロールストックは保存され、作製後に抗体と共に納品されます。グリセロールストックから新たに DNA の調製を行う場合は、当社のプロトコルをご覧ください。

リーダー配列や分泌シグナル配列は、翻訳プロセスの初期に細胞内機構に結合するシグナルペプチドとして機能します。これにより、翻訳複合体が小胞体に正しく局在します。そこでは、抗体鎖が分泌経路に入ることで、タンパク質の組み立てや細胞からの分泌が可能になります。リーダー配列は、タンパク質の組み立て過程で切断され、最終産物には残りません。Twist は、pTwist IgG 発現ベクターを使用する場合、重鎖と軽鎖の両方について以下のリーダー配列を推奨します。これらの配列は、Expi293™ と ExpiCHO™ の両方の細胞株において pTwist ベクターで検査され、検証されています。

VH（重鎖可変領域）：MRAWIFFLLCLAGRALA

VL（軽鎖可変領域）：MRAWIFFLLCLAGRALA

Kozak 配列とは、開始前複合体（PIC）とリボソームを翻訳開始部位（開始コドン）に誘導し、リボソームを正しく組み立てることで、タンパク質配列が正しく翻訳されるようにするものです。

一般的に Kozak 配列は GCCGCCACCATGG と考えられており、ここで ATG は開始コドン（通常はシグナル配列の開始）です。Twist は、開始コドン ATG の上流が GCCGCCACC の配列を推奨しています。

IgG の由来する種やアイソタイプに応じて、抗体の Fc 領域に結合する Protein A または G の固相を用いて精製することができます。または、固定化した抗原（全長またはペプチド抗原）を用いて抗体を精製することも可能です。精製方法は用途、抗体の特性によって異なります。

Twist は、業界標準の細胞株である Thermo Fisher Scientific Expi293™ および Thermo Fisher Scientific ExpiCHO™ を使用しています。

お客様ご自身でご用意された Fc 領域配列（IgG3、マウス IgG、または改変 Fc）の使用や、他の種類の Fc 融合抗体の発現をご希望の場合は、pTwist CMV BG WPRE Neo 発現ベクターをご選択いただけます。

コード配列の末尾には、必ず終止コドンを含めてください。設計に関するご質問は、E メールにて igg@twistbioscience.com までお問い合わせください。

重鎖の C 末端リジン残基（すべての IgG アイソタイプに存在）は、IgG が体内で循環する際に切断されることが研究で示されています。リジンが切断されても機能的な影響はなく、むしろリジンの存在によって、抗体が細胞毒性能を十分に発揮することが阻害されると研究で示されています（以下の文献をご参照ください）。 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4622059/

このシステインは、完全長 IgG においては LC 定常領域とジスルフィド結合を形成しますが、VHH-Fc 融合コンストラクトにはこの結合が存在しません。

可変領域をアップロードする際は、以下の配列の形式になるようにしてください。

• シグナルペプチドが除去されていること（pTwist ベクター＋Twist 推奨シグナルペプチドを使用の場合）
• 可変領域は CH1 開始配列で終わらないようにすること
• ORF が挿入部位と一致している場合、配列が 3 で割り切れる長さを持つこと

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価格に関するお問い合わせはeCommerce内の、「Account」に記載されている当社担当者までご連絡ください。

当社では市販の PBS を用いています。ご要望があれば、下記のカタログ情報ご参照ください。

• PBS 7.4 Cat# 21-031-CM Corning
• PBS 6.0 Cat# P1760 Teknova

Twist は、全ての抗体製品について収量（µg）、純度（%）および還元条件下でのサイズ（kDa）を確認しています。各抗体は、LabChip（CE-SDS）を用いて、重鎖および軽鎖の純度、サイズの確認を行っています。収量は分光光度計（A280）を用いて定量しています。培養上清は、力価測定法を用いて定量します。精製抗体の添付文書には、各抗体の純度、重鎖・軽鎖のサイズに加え、容量、収量および濃度を記載しています。培養上清の添付文書には、”低発現"、"中発現"、"高発現"のうち、いずれかが記載されます。

1 mL：約 220 µL、15 ～ 300 µg

8 mL：約 750 µL、15 ～ 3000 µg

• 96 ディープウェルプレート：カスタムプレートマップが利用可能
• 1.4 mL Micronic チューブラック
• 2 mL チューブ
• 4 mL チューブ
• 10 mL チューブ（8 mL 上清用）