Twistは制限酵素を用いたクローニングを行っておりません。制限酵素の消化と DNA のライゲーションを想定して、インサートには余分なヌクレオチドを含めないようにしてください。

Clonal Genes のご注文をいただくと、お客様によって送信されたインサート配列を正確に合成します。隣接して制限酵素認識部位が含まれている場合は、それも合成します。余分な塩基対が含まれていても削除されません。インサート配列は、受領後一切変更できません。  

Twist ベクターまたはカスタムベクターを使用して Clonal Genes の注文を行う場合は、注文画面の「Download sequences」ボタンから、最終コンストラクトの配列をダブルチェックすることを強くお勧めします。

遺伝子の注文後は、いかなる方法でも配列を変更することはできませんので、ご注意ください。構成に誤りが見つかった場合は、{{[email protected]}} までご連絡ください。

濃度 100 ng/μl のベクター DNA を、100 μl（10 μg）以上ご提供ください。ベクター DNA の量が不足している場合、カスタムベクターの登録プロセスに遅れが生じます。

いいえ。ベクターの完全な配列を Twist にお送りいただく必要があります。この情報は、配列の品質管理とクローニング戦略の確認のために使用します。お客様のベクターをシーケンシングし、お送りいただいた配列と比較します。2 つの配列の間にエラーやミスマッチがあると、カスタムベクター登録が遅れることがあります。

ベクターの全配列を、Twist に送付されるプラスミドの全配列と共に GenBank 形式でアップロードしていただきます（アノテーション等は除いてください）。Twist に到着後、シーケンシングを実施し、配列が一致することを確認します。相違があると、カスタムベクター登録に遅れが生じます。

ベクターが以下の要件を満たしていることをご確認ください。

• ベクター容量：≧ 100 μL（プラスミドはろ紙に載せて提出することはできません）
• ベクター濃度：≧ 100 ng/μL
• ベクター総量：10 μg
• 大腸菌の複製起点を有すること（低コピーではない）
• クローン性集団であること
• 環状（閉環）であること
• 抗生物質耐性マーカーを有すること
• 挿入部位から 40 bp の範囲内に 9 bp を超えるホモポリマー／反復配列を含まないこと
• 反復配列：挿入部位から 19 bp 超以降の上流および下流では、最低 40 bp のユニーク配列を含むこと（直接または逆位反復配列を含まないこと）
• 最終的な遺伝子産物には ccdB（致死性遺伝子）が含まれないこと
• 挿入部位から 50 bp 以内の制限酵素認識部位で切断できること
• BSL-1（バイオセーフティレベル１）対応であること

抗生物質耐性：

プラスミドには、以下の大腸菌の抗生物質耐性マーカーのいずれかが含まれている必要があります。標準的な濃度は以下の通りです。

細胞株（大腸菌）   

• Twist で利用可能な細胞株        
• DH10Beta と同様のクローニング株   
• Stbl3 と同様な（37 ℃で増殖可能な）株        

コピー数            

複製起点を構造に含むもののみ利用可能です。

増殖条件 

• 標準的な温度：37 ℃／30 ℃   
• 標準的な時間：オーバーナイト／24 時間         
• LB-Lennox 上に播種、16 時間／24 時間増殖させた後、コロニーが自動化処理に適した大きさに到達している必要があります。