いいえ。制限酵素を用いたクローニングは行っておりません。制限酵素の消化と DNA のライゲーションを想定して、インサートには余分なヌクレオチドを含めないようにしてください。

プラスミドDNAのご注文をいただくと、お客様によって送信されたインサート配列を正確に合成します。隣接して制限酵素部位が含まれている場合は、それも合成します。余分な塩基対が含まれていても削除されません。インサート配列は、受領後一切変更できません。  

Twist ベクターまたはカスタムベクターを使用してプラスミドDNAの注文を行う場合は、注文画面の「Download sequences」ボタンから、最終構築物の配列をダブルチェックすることを強くお勧めします。

遺伝子の注文後は、いかなる方法でも配列を変更することはできませんので、ご注意ください。構成に誤りが見つかった場合は、{{[email protected]}} までご連絡ください。

濃度 100 ng/μl のベクター DNA を、100 μl（10 μg）以上ご提供ください。ベクター DNA の量が不足している場合、カスタムベクターの作製プロセスに遅れが生じます。

いいえ、ベクターの完全な配列を Twist にお送りいただく必要があります。この情報は、配列のQCとクローニング戦略の確認のために使用します。お客様のベクターをシーケンスし、お送りいただいたシーケンスと比較します。 2つのシーケンス結果の間にエラーやミスマッチがあると、ベクターの作製が遅れることがあります。

ベクターの全配列を、 Twist に送付されるプラスミドの全配列と共に GenBank 形式でアップロードしていただきます。Twist に到着後、シーケンシングが行われ、配列が一致することが確認されます。相違があると、ベクター作製に遅れが生じます。

ベクターが以下の要件を満たしていることをご確認ください。

• ベクター容量：≧ 100 μL（プラスミドはろ紙に載せて提出することはできません）
• ベクター濃度：≧ 100 ng/μL
• ベクター総量：10 μg
• 大腸菌の複製起点を有すること（低コピーではない）
• クローン性集団であること
• 環状（閉環）であること
• 抗生物質耐性マーカーを有すること
• 挿入部位から 40 bp の範囲内に 9 bp を超えるホモポリマー／反復配列を含まないこと
• 反復配列：挿入部位から 19 bp 超以降の上流および下流では、最低 40 bp のユニーク配列を含むこと（直接または逆位反復配列を含まないこと）
• 最終的な遺伝子産物には ccdB（致死性遺伝子）が含まれないこと
• 挿入部位から 50 bp 以内の制限酵素部位で切断できること
• BSL-1（バイオセーフティレベル１）対応であること

抗生物質耐性：

プラスミドには、以下の大腸菌の抗生物質耐性マーカーのいずれかが含まれている必要があります。標準的な濃度は以下の通りです。

細胞株（大腸菌）   

• Twist で利用可能な細胞株        
• DH10Beta と同様のクローニング株   
• Stbl3 と同様な（37 ℃で増殖可能な）株        

コピー数            

複製起点を構造に含むもののみ利用可能です。

増殖条件 

• 標準的な温度：37 ℃／30 ℃   
• 標準的な時間：一晩／24 時間         
• LB-Lennox 上に播種、16 時間／24 時間増殖させた後、コロニーが自動化処理に適した大きさに到達している必要があります。