近年、Peturb-seqなどの遺伝学的ツールが登場し、プールされたCRISPRスクリーンの解析とシングルセルRNAシーケンシングを組み合わせることで、哺乳類の遺伝子機能や遺伝子制御ネットワークに関し、これまでにない知見が得られています。しかし、これらのツールを使おうとすると、そ技術的および実用的な制限に阻まれ、使用が難しい状態にあります。これらの課題を克服するために、カリフォルニア大学サンフランシスコ校、プリンストン大学、10x Genomicsの研究者らは、「ダイレクトキャプチャ」Peturb-seqを開発し、遺伝的相互作用をより高いスループットで調査できるようにしました。さらに、ハイブリダイゼーションを利用したターゲットエンリッチメント手法を追加することで、生物学的に意味のある転写産物のパネルを高感度かつ特異的に配列決定することが可能となり、実験コストを大幅に削減することが可能となっています。In this webinar you will… Learn how Perturb-seq, which combines pooled CRISPR screens with single-cell RNA-sequencing, facilitates unbiased exploration of gene function and delineation of genetic regulatory networks. スクリーニングのスループットを大幅に向上させ、この技術の規模と柔軟性を大幅に拡大したダイレクトキャプチャPerturb-seqの最新技術をご紹介します。細胞あたり複数のsgRNAで個々の遺伝子をターゲットにすることで、CRISPRの干渉と活性化の効果がいかに向上するかをご理解ください。シングルセルスクリーン用のコンパクトで高活性なCRISPRライブラリをご使用になられることと思います。ハイブリダイゼーションを利用したターゲットエンリッチメントにより、対象となる転写産物のシーケンスコストを最大90％削減できます。Twist社のCRISPRオリゴプールとNGSターゲットエンリッチメントソリューションのスケーラビリティおよび精度により、この画期的な技術の開発と応用が後押しされました。

ポストゲノム時代においては、RNAiやCRISPRなどのツールを用い、遺伝子を中心とした大規模な標的探索研究が盛んに行われており、疾患生物学に関する多くの知見が得られています。しかし、これらのツールでは、臨床反応を左右する微妙な生物学的プロセスを解明できないことが多いため、課題が残されています。幸いなことに、新たなスクリーニングツールが今現在使える状態にあり、ターゲットを見つけると同時に、複雑な分子相互作用を調節するメカニズムを明らかにすることができるのです。One such tool is SITESEEKER®, developed by the scientists at PhoreMost.  In this webinar you will: SITESEEKER®がタンパク質干渉（PROTEINi）を利用し、既存のスクリーニングツールよりも大幅に高い複雑性を実現している様子をご紹介します。PROTEINiでは、ターゲットに加えてドラッガブルポケットを見つけることで、ターゲットの同定から創薬までの道のりを短縮することができます。この技術が、がん生物学、神経変性、標的タンパク質分解のハイジャックなど、重要な疾患分野にどのように応用できるかをご覧ください。Twistオリゴプールの長さと忠実度が、なぜPhoreMost社の次世代プラットフォームの開発を可能にしているのかをご覧ください。

CRISPR /Cas9システムを用いた機能的な遺伝子スクリーニングは、遺伝子の機能を大規模に調査するための強力なツールです。ですが、この技術へのアクセスと実装は、これまでに決められたCRISPR sgRNAライブラリによって制約されています。そこで、1つのTwistオリゴプールを、バイオインフォマティクスとウェットラボのワークフローであるCustom Library Multiplexed Cloning (CLUE; crispr-clue.de)と組み合わせて使用し、多数の高品質なカスタムsgRNAライブラリを生成しました。Twistオリゴプールの卓越した忠実性により、クロスライブラリの汚染がなく、得られるCLUEライブラリーのsgRNA発現が均一に保たれます。CRISPRスクリーニングアプリケーションで成功するための厳しい要件が満たされるのです。