Si j’utilise des enzymes de restriction pour le clonage, comment dois-je concevoir mon site d’insertion ?

Nous utilisons une méthode de clonage exclusive basée sur l’homologie pour assembler nos gènes clonaux. Les sites de restriction ne sont donc pas essentiels au clonage et vous n’avez pas besoin de tenir compte de la conception du clonage de Twist lors de la conception de votre insert. Cependant, si votre site d’insertion se trouve entre deux sites de restriction, incluez-les dans le squelette du vecteur, afin de vous assurer que les caractéristiques sont dans le cadre.

Il existe deux options d’utilisation du clonage d’enzymes de restriction.

Option 1 : inclure des sites de restriction sur l’insert

Incluez le site enzymatique de restriction entier à chaque extrémité de la séquence d’insertion. Le sites enzymatiques de restriction feront partie des inserts in silico.

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Lorsque vous commandez des gènes, vous devez inclure des sites enzymatiques de restriction sur les inserts. Dans ce scénario d’intégration de vecteur personnalisé, si vous excluez les sites enzymatiques de restriction sur les gènes dans votre commande, les sites enzymatiques de restriction seront totalement absents de votre produit final.

 

Option 2 : inclure des sites de restriction sur le vecteur

N’incluez pas les sites enzymatiques de restriction sur la séquence d’insertion. Incluez chaque site enzymatique de restriction complet dans la case Vecteur + Insert du formulaire d’intégration Vecteur personnalisé. Les sites enzymatiques de restriction feront partie du vecteur in silico.

 

https://lh4.googleusercontent.com/F9pj9Ttle_JYZ_kePkVmTe3zw22acXAXGuDIGCPDy8YO-PPlD7qcyKavjEyDb5yqv-Y-xzNDCfjWd7D3VRtBXGbBz2KZNlTBilcwB9L7OeiVs5mAfISP2qDsiQZz0P84XD9Q84-v

Lorsque vous commandez des gènes, n’incluez pas de sites enzymatiques de restriction sur les inserts. Dans ce scénario d’intégration de vecteur personnalisé, si vous incluez des sites enzymatiques de restriction sur les gènes dans votre commande, les sites enzymatiques de restriction seront dupliqués dans votre produit final.

 

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