Général

Vous pouvez utiliser une phase solide de protéine A ou G pour purifier, qui se lie à la région FC des anticorps, en fonction de l'espèce et de l'isotype de l'IgG. Vous pouvez également utiliser un antigène immobilisé (antigène peptidique long ou court) pour purifier les anticorps. La méthode dépend de l'application en aval et de la spécificité de l'anticorps.

Les clients peuvent choisir le vecteur d'expression pTwist CMV BG WPRE Neo lorsqu'ils souhaitent utiliser leur propre séquence de région Fc (IgG3, IgG de souris ou Fc modifiée) ou lorsqu'ils ont un autre type d'anticorps de fusion Fc à exprimer.

N’oubliez pas d’inclure un codon d’arrêt à la fin de votre séquence de codage. Si vous avez des questions sur la conception, veuillez envoyer un e-mail à igg@twistbioscience.com pour obtenir de l’aide concernant votre demande personnalisée

Twist fournit des stocks de glycérol de gènes clonaux à partir des gènes clonaux synthétisés pour la production d'anticorps. Pendant la production d'anticorps, l'ADN est consommé pour la transfection ; cependant, les stocks de glycérol sont réservés et livrés avec les anticorps après la production. Veuillez consulter notre protocole pour la préparation d'ADN frais à partir de stocks de glycérol. 

Vous trouverez le tableau des prix de nos produits d’anticorps personnalisés dans votre compte en cliquant ici.

Si vous avez besoin de contacter votre gestionnaire de compte au sujet de la tarification, ses coordonnées sont disponibles dans eCommerce, sous Compte.

Twist utilise les lignées cellulaires standard du secteur, Thermo Fisher Scientific Expi293™ et Thermo Fisher Scientific ExpiCHO™

Une séquence leader ou signal de sécrétion agit comme un peptide signal lié par la machinerie cellulaire au début du processus de traduction. Cela permet la localisation correcte du complexe de traduction dans le réticulum endoplasmique où les chaînes d'anticorps peuvent entrer dans la voie de sécrétion pour l'assemblage de la protéine et la sécrétion de la cellule. La séquence leader est clivée au cours du processus d'assemblage de la protéine et ne fait pas partie de la protéine finale. Twist recommande la séquence leader suivante pour les chaînes lourdes et légères lors de l’utilisation de nos vecteurs d’expression IgG pTwist, car ces séquences ont été testées et validées avec nos vecteurs pTwist dans les lignées cellulaires Expi293™ et ExpiCHO™ :

VH : MRAWIFFLLCLAGRALA

VL : MRAWIFFLLCLAGRALA

La recherche a montré que les résidus lysine C-terminaux de la chaîne lourde (présents sur tous les isotypes d'IgG) sont clivés une fois que l'IgG est en circulation. Des études ont également montré que la lysine n'a pas d'impact fonctionnel une fois qu'elle est clivée et que sa présence empêche l'anticorps d'atteindre son plein potentiel de cytotoxicité : https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4622059/

Veuillez vous assurer que vous disposez du format de séquence suivant pour télécharger les régions variables :

• Suppression du peptide leader de signal (dans le cas d'une utilisation des vecteurs pTwist + peptide leader de signal recommandé par Twist)
• Les régions variables ne doivent pas se terminer par une séquence de départ CH1
• Les séquences sont divisibles par trois si votre ORF est conforme à votre site d’insertion

Cette cystéine dans une IgG complète forme une liaison disulfure avec la région constante LC qui n'est pas présente dans la construction de fusion VHH-Fc.

La séquence Kozak dirige le complexe de pré-initiation (pre-initiation complex, PIC) et le ribosome vers le site d'initiation de la traduction (codon de départ) et assure l'assemblage du ribosome en veillant à ce que la séquence protéique correcte soit traduite.

La séquence consensus Kozak est généralement considérée comme GCCGCCACCATGG, ATG étant le codon de départ (généralement le départ de la séquence signal). Twist recommande la version GCCGCCACC en amont du codon de départ ATG.

Vous pouvez utiliser une phase solide de protéine A ou G pour purifier, qui se lie à la région FC des anticorps, en fonction de l'espèce et de l'isotype de l'IgG. Vous pouvez également utiliser un antigène immobilisé (antigène peptidique long ou court) pour purifier les anticorps. La méthode dépend de l'application en aval et de la spécificité de l'anticorps.

Les clients peuvent choisir le vecteur d'expression pTwist CMV BG WPRE Neo lorsqu'ils souhaitent utiliser leur propre séquence de région Fc (IgG3, IgG de souris ou Fc modifiée) ou lorsqu'ils ont un autre type d'anticorps de fusion Fc à exprimer.

N’oubliez pas d’inclure un codon d’arrêt à la fin de votre séquence de codage. Si vous avez des questions sur la conception, veuillez envoyer un e-mail à igg@twistbioscience.com pour obtenir de l’aide concernant votre demande personnalisée

Twist fournit des stocks de glycérol de gènes clonaux à partir des gènes clonaux synthétisés pour la production d'anticorps. Pendant la production d'anticorps, l'ADN est consommé pour la transfection ; cependant, les stocks de glycérol sont réservés et livrés avec les anticorps après la production. Veuillez consulter notre protocole pour la préparation d'ADN frais à partir de stocks de glycérol. 

Vous trouverez le tableau des prix de nos produits d’anticorps personnalisés dans votre compte en cliquant ici.

Si vous avez besoin de contacter votre gestionnaire de compte au sujet de la tarification, ses coordonnées sont disponibles dans eCommerce, sous Compte.

Twist utilise les lignées cellulaires standard du secteur, Thermo Fisher Scientific Expi293™ et Thermo Fisher Scientific ExpiCHO™

Une séquence leader ou signal de sécrétion agit comme un peptide signal lié par la machinerie cellulaire au début du processus de traduction. Cela permet la localisation correcte du complexe de traduction dans le réticulum endoplasmique où les chaînes d'anticorps peuvent entrer dans la voie de sécrétion pour l'assemblage de la protéine et la sécrétion de la cellule. La séquence leader est clivée au cours du processus d'assemblage de la protéine et ne fait pas partie de la protéine finale. Twist recommande la séquence leader suivante pour les chaînes lourdes et légères lors de l’utilisation de nos vecteurs d’expression IgG pTwist, car ces séquences ont été testées et validées avec nos vecteurs pTwist dans les lignées cellulaires Expi293™ et ExpiCHO™ :

VH : MRAWIFFLLCLAGRALA

VL : MRAWIFFLLCLAGRALA

La recherche a montré que les résidus lysine C-terminaux de la chaîne lourde (présents sur tous les isotypes d'IgG) sont clivés une fois que l'IgG est en circulation. Des études ont également montré que la lysine n'a pas d'impact fonctionnel une fois qu'elle est clivée et que sa présence empêche l'anticorps d'atteindre son plein potentiel de cytotoxicité : https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4622059/

Veuillez vous assurer que vous disposez du format de séquence suivant pour télécharger les régions variables :

• Suppression du peptide leader de signal (dans le cas d'une utilisation des vecteurs pTwist + peptide leader de signal recommandé par Twist)
• Les régions variables ne doivent pas se terminer par une séquence de départ CH1
• Les séquences sont divisibles par trois si votre ORF est conforme à votre site d’insertion

Cette cystéine dans une IgG complète forme une liaison disulfure avec la région constante LC qui n'est pas présente dans la construction de fusion VHH-Fc.

La séquence Kozak dirige le complexe de pré-initiation (pre-initiation complex, PIC) et le ribosome vers le site d'initiation de la traduction (codon de départ) et assure l'assemblage du ribosome en veillant à ce que la séquence protéique correcte soit traduite.

La séquence consensus Kozak est généralement considérée comme GCCGCCACCATGG, ATG étant le codon de départ (généralement le départ de la séquence signal). Twist recommande la version GCCGCCACC en amont du codon de départ ATG.