Assurez-vous que vos vecteurs respectent les exigences suivantes :

• Volume de vecteur ≥ 100 uL (le matériel plasmidique ne peut pas être envoyé sur papier filtre)
• Concentration du vecteur ≥ 100 ng/uL
• Masse du vecteur 10 ug
• Doivent avoir une origine de réplication bactérienne (en non par faible copie)
• Doivent être une population clonale
• Doivent être circulaires
• Doivent avoir un marqueur de résistance aux antibiotiques
• Ne doivent pas contenir d’homopolymères/séquence répétitive > 9 bp dans un rayon de 40 bp du site d’insertion
• Répétitions : doivent contenir au moins 40 bp de séquence unique sans séquences répétées directes ou séquences répétées inverses > 19 bp en amont et en aval du site d’insertion
• Ne doivent pas contenir de ccdB dans le produit de gène final
• Doivent être en mesure de linéariser par site de restriction enzymatique dans un rayon de 50 bp du site d’insertion
• Doivent être conformes au niveau de sécurité BSL-1

Résistance aux antibiotiques :

Le plasmide doit contenir l’un des marqueurs de résistance aux antibiotiques ci-dessous pour l’E.coli. Les concentrations standard sont les suivantes :

Antibiotique	Concentration standard disponible en production (ug/mL)
Kan	50
AMP	100
CHLOR	25
APRA	50
SPEC	100
TET	10
ZEO	50
BLAST	100

Lignées cellulaires (E. coli)       

• Lignée cellulaire disponible en production        
• Souche de clonage semblable à DH10Beta   
• Souche semblable à Stbl3 (peut être cultivée à 37 ℃)        

Nombre de copies              

Seules les origines constitutives de la réplication sont autorisées.

Définition par Twist	Accepté	Exemple
Élevé	Oui	ColE1/pMB1/pBR322/pUC
Moyen	Oui, rendement de miniprep réduit	p15A
Faible	Non	pSC101

Conditions de culture     

• Température standard : 37 ℃/30 ℃   
• Durée standard : du jour au lendemain/24 heures         
• Les colonies sur plaque doivent atteindre une taille permettant l’automatisation après 16 heures/24 heures de culture sur LB-Lennox.