Este protocolo de agotamiento de ARN y preparación de bibliotecas de ARN detalla todos los pasos necesarios para construir bibliotecas de secuenciación en sistemas de secuenciación de última generación (NGS) de Illumina. Los pasos incluyen el agotamiento de los transcritos ribosómicos y de hemoglobina, la conversión del ARN en ADNc bicatenario y la preparación de bibliotecas de ADNc utilizando el sistema de adaptador universal Twist. El sistema de adaptador universal Twist consta de adaptadores universales Twist y cebadores de índice doble únicos (UDI) Twist. Este kit también es compatible con el sistema de adaptador universal de alto rendimiento Twist, que consta de adaptadores universales Twist y cebadores de índice doble único (UDI) de alto rendimiento Twist. Este protocolo detalla los pasos para eliminar el ARN ribosómico y la hemoglobina del ARN total con el fin de generar bibliotecas de ADNc amplificadas e indexadas que puedan someterse a la secuenciación del transcriptoma completo. Si se desea, las bibliotecas de transcriptoma completo son compatibles con los flujos de trabajo de enriquecimiento del objetivo Twist. Este protocolo se ha optimizado para su uso con los reactivos especificados y solo debe realizarse con ellos o con sus equivalentes.