Anticuerpo

Los clientes pueden seleccionar el vector de expresión pTwist CMV BG WPRE Neo cuando deseen utilizar su propia secuencia de región Fc (IgG3, IgG de ratón o región Fc modificada) o tener otro tipo de anticuerpo de fusión Fc para la expresión.

Recuerde incluir un codón de terminación al final de la secuencia de codificación. Si tiene alguna pregunta sobre el diseño, envíe un correo electrónico a igg@twistbioscience.com para obtener ayuda con su solicitud personalizada.

Twist proporciona reservas de glicerol de genes clonados de los genes clonados sintetizados para la producción de anticuerpos. Durante la producción de anticuerpos, el ADN se consume para la transfección; sin embargo, las reservas de glicerol se reservan y suministran con los anticuerpos posproducción. Consulte nuestro protocolo de preparación de ADN nuevo a partir de las reservas de glicerol. 

Asegúrese de disponer del formato de secuencia siguiente para cargar regiones variables:

• Péptido líder de señal eliminado (si se están usando vectores pTwist + péptido líder de señal recomendado por Twist)
• Las regiones variables no deben finalizar con ninguna secuencia inicial CH1
• Las secuencias pueden dividirse entre tres si el ORF está alineado con el sitio de inserción

Puede utilizar una fase sólida de proteína A o G para purificar, lo que une a la región FC de los anticuerpos, en función de la especie y el isotipo de la IgG. También puede utilizar un antígeno inmovilizado (antígeno de péptido corto o de longitud completa) para purificar los anticuerpos. El método dependerá de la aplicación posterior y de la especificidad del anticuerpo.

Una secuencia líder o de señal secretora actúa como señal de péptido dirigida por la maquinaria celular al inicio de los procesos de traducción. Esto permite la localización correcta del complejo de traducción al retículo endoplasmático donde las cadenas de anticuerpos pueden acceder a la vía secretora para el ensamblaje de proteínas y la secreción de la célula. La secuencia líder se escinde durante el proceso de ensamblaje de proteínas y no es parte de la proteína final. Twist recomienda la siguiente secuencia líder para las cadenas pesada y ligera cuando se utilizan nuestros vectores de expresión de IgG pTwist, ya que estas secuencias se han probado y validado con nuestros vectores pTwist tanto en líneas celulares Expi293™ como ExpiCHO™:

VH: MRAWIFFLLCLAGRALA

VL: MRAWIFFLLCLAGRALA

La secuencia kozak dirige al complejo de preiniciación (PIC) y al ribosoma al lugar de iniciación de la traducción (codón inicial) y media en el ensamblaje del ribosoma para garantizar que se traduzca la secuencia de proteínas correcta.

La secuencia Kozak de consenso normalmente se considera GCCGCCACCATGG, donde el ATG es el codón inicial (típicamente el inicio de la secuencia de señal). Twist recomienda utilizar la GCCGCCACC de versión aguas arriba del ATG de codón de inicio.

Puede encontrar la tabla de precios para nuestros productos de anticuerpos personalizados de su cuenta haciendo clic aquí.

Si necesita ponerse en contacto con su administrador de cuentas por algún aspecto relacionado con los precios, encontrará su información de contacto en el sitio de comercio electrónico en Account (Cuenta).

Twist emplea las líneas celulares estándar del sector, Thermo Fisher Scientific Expi293™ y Thermo Fisher Scientific ExpiCHO™

La investigación ha demostrado que los residuos de lisina C-terminal de la cadena pesada (presentes en todos los isotipos de IgG) se escinden una vez que la IgG está en circulación. Los estudios han demostrado que no existe un impacto funcional de la lisina una vez se ha escindido y su presencia es realmente inhibidora para permitir que el anticuerpo alcance su máximo potencial de citotoxicidad: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4622059/

La cisteína en una IgG completa forma un puente disulfuro con la región constante de la cadena ligera que no está presente en la construcción de la fusión VHH-Fc.

Twist inspecciona cada producto de anticuerpos en cuanto al rendimiento (μg), la pureza (%) y el tamaño (kDa) en condiciones reductoras. Cada anticuerpo se inspeccionará mediante LabChip (CE-SDS) en cuanto a la pureza y el tamaño de las cadenas pesadas y ligeras individuales. Los rendimientos se cuantifican mediante lecturas A280. Las muestras de sobrenadantes se cuantifican mediante un método de determinación de títulos. En la documentación finalizada, cada anticuerpo purificado tendrá valores comunicados de volumen, rendimiento y concentración, además de la pureza porcentual y la determinación del tamaño de las cadenas pesadas y ligeras. La documentación acerca de los sobrenadantes proporcionará los niveles de expresión de los títulos de anticuerpos de niveles de expresión baja, media o alta.

Utilizamos PBS disponible en el mercado. Comparta la información del catálogo con el cliente bajo petición:

• PBS 7.4 n.º catálogo 21-031-CM Corning
• PBS 6.0 n.º catálogo P1760 Teknova

• Placas de 96 pocillos profundos: mapas de placas personalizados disponibles
• Soportes de tubos micrónicos de 1,4 ml
• Tubos de 2 ml
• Tubos de 4 ml
• Tubos de 10 ml (solo para sobrenadantes de 8 ml)

1 ml = ~220 µl de volumen, 15-300 µg

8 ml = ~750 µl de volumen, 15-3000 µg