You can find the pricing table for Gene Fragment products in your account by clicking here.

If you need to contact your Account Manager regarding pricing, their contact information is available in eCommerce under Account.

以下の方法で、アダプター付き遺伝子フラグメントをクローニングできます。

Restriction digestion/Ligation - place restriction sites inside of the Twist adapters for easy cloning

Type IIS or Golden Gate - place restriction sites inside of the Twist adapters for easy cloning TOPO cloning (blunt-end) - the adapter sequences will be cloned in as well

Gateway cloning - add attB sites to the ends of your sequence

For more information, click here.  

Adapter-On Gene Fragments の場合、各断片の末端にユニバーサルアダプターが合成されます。アダプターの長さは 21 ～ 22 ヌクレオチドです。アダプター付き DNA 断片は、制限酵素消化／ライゲーション、Gateway、Golden Gate、TOPO クローニングなど、多くのアセンブリ手法に対応しています。

アダプター内に制限部位を加えることで、アダプターを取り除くことができます。TOPO クローニングにもご利用いただけますが、アダプターは付いたままになります。
アダプター配列

• 2021 年 8 月 9 日以前のご注文の場合、アダプター配列は以下の通りとなります。
  • 5' アダプター：GAAGTGCCATTCCGCCTGACCT
  • 3' アダプター：AGGCTAGGTGGAGGCTCAGTG
  • 5’ – GAAGTGCCATTCCGCCTGACCT – insert – AGGCTAGGTGGAGGCTCAGTG – 3'

• 2021 年 8 月 9 日～2021 年 11 月 1 日の期間にご注文の場合、アダプター配列は以下の通りとなります。
  • 5' アダプター：CCCCGTCACCTTTGGCTTATCAGT
  • 3' アダプター：AGTGACATCTGGACGCTAAGACCG
  • 5’ - CCCCGTCACCTTTGGCTTATCAGT – insert – AGTGACATCTGGACGCTAAGACCG - 3'

• 2021 年 11 月 2 日以降のご注文の場合、アダプター配列は以下の通りとなります。
  • 5' アダプター：CAATCCGCCCTCACTACAACCG
  • 3' アダプター：CTACTCTGGCGTCGATGAGGGA
  • 5’ - CAATCCGCCCTCACTACAACCG – insert – CTACTCTGGCGTCGATGAGGGA - 3'

※アダプターとは、合成プロセスにおいてインサートの各末端に付加される短い配列のことです。アダプターが付いていない Gene Fragments もご注文頂けます。

ご注文につきましてご不明な点がございましたら、{{[email protected]}} までお問い合わせください。

はい。Gene Fragments については、ビーズを用いて精製を行いますが、短い断片については少量の場合は実施しないこともあります。

• 2021 年 8 月 9 日以前のご注文の場合、アダプター配列は以下の通りとなります。
  • 5' アダプター：GAAGTGCCATTCCGCCTGACCT
  • 3' アダプター：AGGCTAGGTGGAGGCTCAGTG
  • 5’ – GAAGTGCCATTCCGCCTGACCT – insert – AGGCTAGGTGGAGGCTCAGTG – 3'

• 2021 年 8 月 9 日～2021 年 11 月 1 日の期間にご注文の場合、アダプター配列は以下の通りとなります。
  • 5' アダプター：CCCCGTCACCTTTGGCTTATCAGT
  • 3' アダプター：AGTGACATCTGGACGCTAAGACCG
  • 5’ - CCCCGTCACCTTTGGCTTATCAGT – insert – AGTGACATCTGGACGCTAAGACCG - 3'

• 2021 年 11 月 2 日以降のご注文の場合、アダプター配列は以下の通りとなります。
  • 5' アダプター：CAATCCGCCCTCACTACAACCG
  • 3' アダプター：CTACTCTGGCGTCGATGAGGGA
  • 5’ - CAATCCGCCCTCACTACAACCG – insert – CTACTCTGGCGTCGATGAGGGA - 3'

※アダプターとは、合成プロセスにおいてインサートの各末端に付加される短い配列のことです。アダプターが付いていない Gene Fragments もご注文頂けます。

If you have any questions about your order, please contact us at customersupport@twistbioscience.com

当社ウェブサイト上でのコドン最適化に対応している生物種の一覧：

• Arabidopsis thaliana
• Aspergillus niger
• Aspergillus oryzae
• Bacillus subtilis
• Brassica napus
• Caenorhabditis elegans
• Cricetulus griseus (CHO)
• Drosophila melanogaster
• Escherichia coli
• Glycine max
• Homo sapiens
• Hypocrea jecorina
• Medicago sativa
• Mus musculus
• Nicotiana tabacum
• Petunia x hybrida
• Pichia pastoris
• Pisum sativum
• Rattus norvegicus
• Saccharomyces cerevisiae
• Solanum tuberosum
• Spodoptera frugiperda
• Streptomyces coelicolor A3(2)
• Sus scrofa
• Toxoplasma gondii
• Xenopus laevis
• Yarrowia lipolytica
• Zea mays

If you do not see your specific organism, contact customersupport@twistbioscience.com

現在のところ「Impossible」と判定された遺伝子の合成はできません。当社のアルゴリズムが遺伝子を「Impossible」と判定する要因はいくつかあり、遺伝子配列ごとに特定のパラメータが用いられています。当社のアルゴリズムは、機械学習を用いて開発された独自のものです。機械学習に加えて、当社のアルゴリズムは以下の要素も考慮します。

• GC 含量（25 ～ 65%）
• 最大ホモポリマー長（< 10 塩基対）
• 低い相同性

上記を組み合わせた結果として、特定の遺伝子配列が「Impossible」と判定されます。

野生型タンパク質の発現を維持するために：

• レアコドン（コドン頻度が 8% 未満のもの）の使用は避けます。
• 得られた配列の最初の 48 塩基対に強いヘアピン構造（ΔG < －8）がないことを確認します。
• 含まないように依頼された酵素切断部位がないか、二本鎖の両方を確認します。
• 強いシグマ 70 結合部位を作らないようにすることで、発現配列の内部にプロモーター配列を導入することを避けます。
• リボソームと強く結合する部位となる配列（GGAGG や TAAGGAG）は避けます。
• ターミネーター配列（TTTTT や AAAAA）となる配列は避けます。

遺伝子合成の成功率を高めるために：

• 20 塩基対より長い反復配列は導入しない。
• 10 塩基以上のホモポリマー配列を避ける。
• 全体的な GC 含量が 25% 未満または 65% 超、局所領域（50 bp）の GC 含量が 35% 未満または 65% 超になるような配列を避ける。

なお、コドン最適化は合成の成功率を上げることに有効であり、タンパク質の発現向上には有効ではありません。

はい。主に反復配列、極端な GC 含量、ホモポリマーによって合成に問題が生じる場合があります。当社では、機械学習法を用いて成功の可能性を判断しています。そのため、ほとんどの場合、配列が拒否される理由は 1 つではありません。むしろ、複雑さや受け入れ拒否の要因は、配列がある特定の複雑性のカテゴリーに分類されるような、複数の要因が組み合わさって生じます。唯一の厳格なルールは次のとおりです。

• 14 bp 以上のホモポリマーを避ける

• CcdB（II 型毒素–抗毒素系）を含めない

問題が発生した場合、反復、極端な GC 含量の領域、ホモポリマーを除去するか、最小限に抑えることが推奨されます。配列が複雑で構築できない場合や当社の内部プロセスと矛盾する配列が含まれている場合、当社で問題の領域を強調表示します。

遺伝子配列を当社ウェブサイト上で送信されますと、アセンブリが実行可能かを自動で判定します。

Standard: No errors have been found. 遺伝子配列は全体的に「標準的」な複雑性（長さ、GC 含量、相同性など）を持ちます。

Complex: No errors have been found. いくつかの複雑な配列（長さ、GC 含量、相同性など）が存在しますが、遺伝子合成に問題はないと考えられます。まれに、配列の納期が延びたり、合成失敗となるリスクがあります。

Error: Gene sequence contains errors. 解決方法の詳細については、その配列をクリックしてください。

Not Accepted: The sequence contains elements that make it impossible for us to synthesize. エラーメッセージの詳細をご覧になるか、「Design Guidelines（設計ガイドライン）」をご参照ください。

スコアリングシステムについて

当社のスコアリングシステムで採用している機械学習モデルでは、複数の配列パラメータ（全体の GC 含量、最大ホモポリマー長、最大リピート長、配列長、リピート密度など）を解析し組み合わせます。このモデルは、当社の過去の製造データを用いてトレーニングしたもので、遺伝子や抗体製品の合成成功率をより正確に推定することが可能です。

ISSUE メッセージについて

Warnings: Are associated with the risk of failure, predicted by the machine learning model. 警告の数が多いほど、「受け入れ不可」と判定される確率が高くなります。

Errors: Are not associated with gene complexity, and they can be fixed by correcting the gene design

弊社ウェブサイトでは、アミノ酸配列を入力いただき、合成用の DNA配列に変換します。配列のアップロード画面にて、「Amino Acid Sequence」をご選択ください。


 アミノ酸を１文字表記でご入力ください。注文プラットフォームでは、標準的な１文字コード 20 文字のみお使いいただけます。

アミノ酸配列の最後に「*」を付けると、それは終止コドンを意味します（終止コドンは自動的には追加されません）。

選択された Codon Usage Table に基づいて、最も頻繁に使用されるコドンが選択されます。

ご希望の生物種が見当たらない場合は、customersupport@twistbioscience.com までお問い合わせください。

Clonal Genes に関する注意点：すべてのTwist発現ベクターが、インサート挿入部位の上流に標準的な発現カセットを備えているわけではありません。We recommend double-checking the sequence of your final plasmid construct by clicking "Download Sequences"after selecting your desired vector. 

Oligo Pools、Gene Fragments（二本鎖 DNA 断片）、Clonal Genes（プラスミド DNA）からご希望に応じてご注文可能です。

オリゴプールに含まれるオリゴヌクレオチド（直鎖状の一本鎖 DNA）の鎖長は、20 ～ 300 bp です。

Gene Fragments は、鎖長 300 ～ 5,000 bp の直鎖状の二本鎖 DNA です。

Clonal Genes は、Twist のベクターまたはお客様から提供されたカスタムベクターにクローニングした二本鎖 DNA です。Clonal Genes で合成可能なインサート鎖長は 300 ～ 5,000 bp です。