Universal Blockers

Twist Universal Blockers の堅牢なデザインは柔軟性を最大化し、ターゲットエンリッチメントのワークフローを効率化します。すべての Twist ターゲットエンリッチメントパネルに対応し、インデックス配列の種類に関係なく、シングルプレックスおよびマルチプレックス両方のターゲットエンリッチメントワークフローにわたり、パネルサイズにも依存せず、オンターゲットリードのキャプチャを改善します。Twist Universal Blockers を使用すると、ターゲットエンリッチメントのパフォーマンスを損ねることなく、実験に最適なアダプターインデックスのデザインを選択することができます。

パフォーマンスは、インデックスのデザインには依存しません。この図では、さまざまなシングル／デュアルインデックス TruSeq 対応アダプターにおける Twist Universal Blockers のオンターゲットパフォーマンスを示しています。個々のライブラリは、単一ゲノムソース（NA12878；Coriell）とインデックス長が 6 ～ 14 bp の TruSeq 対応アダプターから作製しました（分子バーコード [Unique Molecular Identifier : UMI] の長さは含まれていません）。ハイブリッドキャプチャは、 Twist Universal Blockers を用いない条件または用いる条件で、エクソーム ターゲットエンリッチメントパネル（33.1 Mb； Twist Bioscience）とライブラリあたり 500 ng のゲノム DNA を用いて、16 時間のハイブリダイゼーション反応というメーカー推奨に従って実施しました。Cot DNA をすべてのサンプルに用いました。NextSeq 500/550 High Output v2 キットを用いてシーケンス解析を行い、2 × 76 のペアエンドリードを生成しました。データはターゲットサイズの 150x にダウンサンプリングし、マッピング品質閾値 20 の設定で Picard Metrics を使用して解析しました。On-Bait の塩基のパーセンテージは、On-Bait と Near-Bait の塩基両方を含み、1 － PCT_OFF_BAIT の式で定義されます。エラーバーは、標準偏差すなわち測定値の範囲を示しています（N ≥ 2）。

パフォーマンスは、パネルサイズには依存しません。こちらの図では、さまざまなパネルサイズでの Twist Universal Blockers のオンターゲットパフォーマンスを示しています。個々のライブラリは、単一のゲノムソース（NA12878; Coriell）と 8 bp のデュアルインデックス TruSeq 対応アダプターから作製しました。ハイブリッドキャプチャは、 Twist Universal Blockers を用いない条件または用いる条件で、さまざまなサイズのターゲットエンリッチメントパネル（0.04 Mb ～ 33.1 Mb； Twist Bioscience）とライブラリあたり 500 ng のゲノム DNA を使用して、16 時間のハイブリダイゼーション反応というメーカー推奨に従って行いました。Cot DNA をすべてのサンプルに用いました。NextSeq 500/550 High Output v2 キットを用いてシーケンス解析を行い、2 × 76 のペアエンドリードを生成しました。データはターゲットサイズの 150x にダウンサンプリングし、マッピング品質閾値 20 の設定で Picard Metrics を使用して解析しました。On-Bait の塩基のパーセンテージは、On-Bait と Near-Bait の塩基両方を含み、1 － PCT_OFF_BAIT の式で定義されます。エラーバーは測定値の範囲を示しています（N = 2）。